[发明专利]一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法

说明书

本发明公开了一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法。本发明所提供的方法是利用封锁DNA对目标miRNA进行结构封锁，形成locker/miRNA组装体。locker/miRNA组装体不与miRNA/SP杂交体竞争界面捕获探针位点，同时在信号探针存在的情况下仍可以形成miRNA/SP杂交体，即可抑制假阴性信号的形成，保障检测结果的准确性。实验证明，采用本发明提供的方法检测待测样本中目标miRNA的含量成本低且准确率高，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法。

背景技术

MicroRNA(miRNA)是一类长度约为18-25个核苷酸的非编码内源性单链RNA分子，它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对，引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译，从而实现对靶基因转录后的调控。现有研究表明，miRNA可作为癌症标志物用于癌症早期诊疗。

传统的miRNA定量检测依赖于PCR等扩增手段，该类手段虽然检测灵敏，然而也有高成本、操作复杂、检测耗时长、需借助大型仪器等不足。传统的miRNA定量检测主要有三类：第一类是基于直接杂交的定量检测技术，优点是通量高(即一次可以检测多个miRNA的表达情况)，缺点是成本高，还存在同一miRNA家族成员之间互相错配杂交的噪音信号，且不适合表达量较低的miRNA检测；第二类是结合PCR与探针的定量检测技术，需要使用miRNA特异的探针，这类方法的突出优点是特异性强，常常能区分同一miRNA家族的不同变体，缺点是探针的设计与合成需借助于商业公司，方便性与特异性很难得到统一的解决；第三类是基于PCR与荧光染料的定量检测技术，优点是灵敏度高，但检测耗时长且需借助大型仪器。

随着生物传感器的快速发展，以核酸等生物材料作为信号识别元件，可以在短时间内不基于扩增技术实现对miRNA的定量检测。基于miRNA核酸材料的特异性杂交性能，一种经典的miRNA生物传感模式是利用固定于传感界面的捕获探针(CP)和荧光标记的信号探针(SP)分别与miRNA两端进行杂交的夹心型生物传感器，可以快速、高灵敏度和高选择性的定量检测复杂基质中的miRNA。但是，夹心型生物传感器在开发中面临如下挑战：对于固载捕获探针数目有限的界面而言，当miRNA的量超过溶液中的信号探针时，miRNA与miRNA/SP杂交体一起竞争界面捕获探针的杂交位点，产生假阴性信号，极大程度上干扰检测结果。一种抑制假阴性信号的形成的策略是采用大量的信号探针(如2013年Yanli Wen，Gang Liu，Hao Pei等人在《Methods》上发表的基于DNA纳米结构的超灵敏电化学夹心型miR生物传感器中，使用高于miRNA浓度500倍以上的信号探针进行检测)，但超高浓度的信号探针将提升单次检测成本，且可能对界面形成非特异性吸附，引发假阳性信号，不利于提升检测的准确性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测待测样本中目标miRNA的含量。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法，即生物传感器检测方法：将捕获探针固定在传感界面上，信号探针与目标miRNA的复合物被捕获探针捕获，通过检测荧光信号即检测出被捕获的目标miRNA的量。

本发明所提供的检测待测样本中目标miRNA的含量的方法，可包括步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)：

所述步骤(a)可包括如下步骤：

(a-1)信号探针、封锁DNA和待测样本混匀，孵育；

(a-2)完成步骤(a-1)后，采用捕获探针检测荧光信号值；

所述步骤(b)可包括如下步骤：

(b-1)所述信号探针、所述封锁DNA和目标miRNA标准溶液混匀，孵育；

(b-2)完成步骤(b-1)后，采用所述捕获探针检测荧光信号值；