[发明专利]一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法

权利要求书

1.一种检测待测样本中目标miRNA的含量的方法，包括步骤（a）、步骤（b）和步骤（c）：

所述步骤（a）包括如下步骤：

（a-1）信号探针、封锁DNA和待测样本混匀，孵育；

（a-2）完成步骤（a-1）后，采用捕获探针检测荧光信号值；

所述步骤（b）包括如下步骤：

（b-1）所述信号探针、所述封锁DNA和目标miRNA标准溶液混匀，孵育；

（b-2）完成步骤（b-1）后，采用所述捕获探针检测荧光信号值；

所述步骤（c）：根据所述目标miRNA标准溶液中目标miRNA的浓度和相应荧光信号值绘制标准曲线，将所述步骤（a-2）得到的荧光信号值代入所述标准曲线，得到待测样本中目标miRNA的含量；

所述目标miRNA为单链RNA分子，自5’末端到3’末端依次包括如下元件：A1片段和A2片段；

所述信号探针为单链DNA分子，包括如下元件：S1片段；所述S1片段的核苷酸序列与所述A1片段的核苷酸序列反向互补；所述信号探针具有荧光基团；

所述封锁DNA为单链DNA分子，自5’末端到3’末端依次包括如下元件：B1片段、B2片段和B3片段；所述B1片段的核苷酸序列与所述A2片段的核苷酸序列反向互补；所述B3片段的核苷酸序列与所述A1片段的核苷酸序列反向互补；所述B2片段由n3个脱氧核糖核苷酸组成，且不能与所述目标miRNA、所述信号探针和所述捕获探针进行杂交；所述捕获探针为单链DNA分子，包括如下元件：E2片段；所述E2片段的核苷酸序列与所述A2片段的核苷酸序列反向互补；

所述信号探针和所述目标miRNA形成的组装体的稳定性大于所述封锁DNA和所述目标miRNA形成的组装体的稳定性；

所述封锁DNA和所述目标miRNA形成的组装体的稳定性大于所述捕获探针和所述目标miRNA形成的组装体的稳定性；

所述目标miRNA为单链RNA分子let-7；

所述信号探针为单链DNA分子，核苷酸序列如序列表中序列2所示；

所述封锁DNA为单链DNA分子，核苷酸序列如序列表中序列3所示；

所述捕获探针为单链DNA分子，核苷酸序列如序列表中序列1所示；

所述方法用于非疾病的诊断和治疗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述信号探针的3’末端具有荧光基团。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步骤（a-1）或（b-1）中，所述孵育的体系中还含有杂交缓冲液；所述杂交缓冲液为含0.20-0.30M MgCl₂的pH7.5-8.0、9-11mM Tris-HCl缓冲液。

4.如权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：所述待测样本为待测液相样本。

5.一种检测待测样本中目标miRNA的含量的试剂盒，包括权利要求1中所述封锁DNA、所述捕获探针和所述信号探针；所述目标miRNA为单链RNA分子let-7。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括权利要求3中所述杂交缓冲液。

7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括光纤。

8.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述待测样本为待测液相样本。

9.权利要求5至8任一所述试剂盒在检测待测样本中目标miRNA的含量中的应用；

所述目标miRNA为单链RNA分子let-7；

所述应用用于非疾病的诊断和治疗。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述待测样本为待测液相样本。