[发明专利]一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达和纯化方法

权利要求书

1.一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：克隆二氢硫辛酸脱氢酶的全部基因，并与克隆载体体外构建重组表达质粒，然后将构建的重组表达质粒转化宿主大肠杆菌，表达二氢硫辛酸脱氢酶LPD；所述克隆载体为pBR322质粒；构建重组表达质粒时，通过限制性内切酶位点NheI和AvaI构建重组表达质粒；构建重组表达质粒时，保留了pBR322的Amp抗性编码序列，剔除了Kan抗性编码区域。

2.如权利要求1所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：所述二氢硫辛酸脱氢酶的全部基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：所述克隆载体为剔除了启动子的PET表达载体。

4.如权利要求1所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：所述宿主大肠杆菌为BL21（DE3）菌株。

5.如权利要求1所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：还包括对二氢硫辛酸脱氢酶LPD的纯化。

6.如权利要求5所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：破菌液上清采用羟基磷灰石层析柱以磷酸缓冲溶液作为洗脱液洗脱纯化。

7.如权利要求6所述二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：所述磷酸缓冲溶液的pH为7.5，浓度50-500 mmol/L。