[发明专利]一种特异性甲基化检测引物及子宫内膜异位症诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种特异性甲基化检测引物及子宫内膜异位症诊断试剂盒，涉及生物技术领域。本发明针对内异症基因组中SF‑1基因设计了用于内异症特异性甲基化检测的PCR扩增引物和相关的试剂盒。用该引物和试剂盒对待测亚硫酸氢盐修饰后的样本DNA进行PCR扩增，根据扩增产物的测序结果获得SF‑1基因的甲基化位点信息，根据甲基化位点信息判断待测样本是否是发生了子宫内膜异位症患者的样本，从而实现子宫内膜异位症的诊断。本发明提供的引物或试剂盒可能够早期客观、灵敏和稳定的诊断子宫内膜异位症，以便进行及时、有针对性的治疗，改善育龄期妇女的生活质量。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种特异性甲基化检测引物及子宫内膜异位症诊断试剂盒。

背景技术

子宫内膜异位症(endometriosis，内异症)是引起盆腔疼痛和不孕的常见因素,是指具有生长功能的子宫内膜组织在子宫腔被覆粘膜以外的其他部位生长、浸润、反复出血,可形成结节及包块。子宫内膜异位症是激素依赖性疾病，主要见于育龄妇女。近年来，其发病率越来越高，育龄妇女中的发病率约为10％，然而，由于它与不孕和盆腔痛的关系，在这些女性人群中，其患病率明显要高，已成为妇科常见病。据报道，不孕症妇女的内异症患病率为25％-35％，盆腔痛的妇女达39-59％。而内异症患者50％的病人有明显的痛经，30％合并不孕，严重地影响中青年妇女的健康和生活质量。

子宫内膜异位症为妇科良性疾病，但具有恶性行为，发病率逐年上升，临床早期误诊率可达70％。而且，内异症的早期诊断比较困难，容易漏诊。现有的诊断方法有：

影像学诊断：如超声、CT、MRI等，但主要适合于子宫内膜异位症囊肿的患者，有一定的局限性。

血CA125测定：CA125是一种高分子糖蛋白结构的抗原，开始只是上皮性卵巢癌的肿瘤标志物。上世纪80年代以来，学者们逐渐发现CA125余子宫内膜异位症有密切关系：子宫内膜异位症患者的血清CA125水平明显高于正常生育期妇女。在I～II期患者中，血清CA125水平虽有升高，但与正常妇女有交叉；而III～Ⅳ期等重度患者中，血清CA125水平越高，病情越重。以血清CA125升高为诊断标准，敏感性50～68％。血清CA125的测定对内异症诊断有一定的意义，但是按美国生育协会对内异症分期的标准，只有III～Ⅳ期有卵巢子宫内膜异位囊肿、病灶浸润较深、盆腔粘连广泛者血CA125阳性率较多，I～II期子宫内膜异位症血CA125多正常。因此，血清CA125对内异症的诊断特异性低，提示CA125阴性者亦不能排除内异症。

血清抗体检测：已知子宫内膜异位症是一种自身免疫性疾病，内异症患者患者由于细胞免疫缺陷，子宫内膜中某些抗原在激素作用下表达与患者血清中可溶性的抗原，从而产生抗体，即子宫内膜抗体。正常妇女血清中的子宫内膜抗体阴性或在一基线水平，它的存在可能与不孕有关，内异症患者的血清子宫内膜抗体阳性率在 60％以上。虽然有一定的诊断价值，但也存在局限性，因为子宫内膜抗原的制备和检测方法的不同有较大差异。

腹腔镜：腹腔镜是诊断子宫内膜异位症的最佳方法，特别是对不明原因不育或腹痛者首选腹腔镜检查，当镜下看到典型子宫内膜异位症时，即可确定诊断。不过，肉眼诊断的子宫内膜异位病灶，只有约70％得到病理证实。