[发明专利]一种特异性甲基化检测引物及子宫内膜异位症诊断试剂盒

权利要求书

1.一种子宫内膜异位症诊断试剂盒，其特征在于，利用由第一引物对和第二引物对组成的特异性引物同时扩增经亚硫酸氢钠修饰的待测样本的SF-1基因中的至少一个CpG岛中的启动子区域和内含子/外显子区域，通过同时检测SF-1基因的启动子区域的第+7和第+121位点和内含子/外显子区域的第+4114和第+4215位点的甲基化信息，判断待测样本是否为子宫内膜异位症患者样本，若自SF-1基因的转录起始点起的第+7和+121位点未发生甲基化、第+4114和+4215位点发生甲基化，则诊断待测样本是患有子宫内膜异位症的样本；若自SF-1基因的转录起始点起的第+7和+121位点发生甲基化、第+4114和+4215位点未发生甲基化则诊断待测样本不是患有子宫内膜异位症的样本；

其中，所述特异性引物包括：如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ ID NO.2所示的下游引物组成的第一引物对；和如SEQ ID NO.3所示的上游引物和如SEQ ID NO.4所示的下游引物组成的第二引物对；

其中，所述子宫内膜异位症诊断试剂盒还包括PCRmaster mix。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述通过扩增经亚硫酸氢钠修饰的待测样本的SF-1基因中的至少一个CpG岛，并同时检测SF-1基因的启动子区域位点和内含子/外显子区域位点的甲基化信息，判断待测样本是否为子宫内膜异位症患者样本包括：

对待测样本提取的DNA进行亚硫酸氢盐修饰，使样本SF-1基因CpG岛中未发生甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶；

对所述经过亚硫酸氢盐修饰的样本DNA进行PCR扩增处理，获得大量SF-1基因片段；

对所述SF-1基因片段依次进行纯化、TA克隆，取阳性克隆进行测序并同时分析第+7、+121、+4114、+4215位点是否发生甲基化，得到待测样本是否为子宫内膜异位症患者样本的诊断结果。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述对经过亚硫酸氢盐修饰的样本DNA进行PCR扩增处理，用于获得SF-1基因片段的特异性引物的扩增处理包括：建立以待测样本的DNA为模板，以SEQ ID NO.1-4建立的反应体系在90℃10min， 95℃30s、50℃2min和72℃2min的40个循环，72℃7min的扩增条件下进行扩增处理。

4.一种检测SF-1基因特异性甲基化的引物，其特征在于，其扩增经亚硫酸氢钠修饰SF-1基因中的至少一个CpG岛，包括：

如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ ID NO.2所示的下游引物组成的第一引物对；

如SEQ ID NO.3所示的上游引物和如SEQ ID NO.4所示的下游引物组成的第二引物对。

5.一种将权利要求4所述的引物应用于检测非诊断目的的子宫内膜异位症的用途。

6.如权利要求5所述的将权利要求4所述的引物应用于检测非诊断目的的子宫内膜异位症的用途，其特征在于，将利用引物扩增获得的所述CpG岛进行启动子区域位点和内含子/外显子区域位点的甲基化信息分析，根据启动子区域位点和内含子/外显子区域位点甲基化位点信息判断待测样本是否是发生了子宫内膜异位症的样本；

其中，所述甲基化位点信息包括自SF-1基因转录起始点起第+7、+121、+4114和+4215位点的信息。

7.一种将权利要求4所述的引物应用于制备检测人内异症试剂中的应用。