[发明专利]戊型肝炎病毒实时荧光逆转录PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法有效
| 申请号： | 201710322672.8 | 申请日： | 2017-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN107287347B | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 孙薇;陆敏;苏艳丽;毕英杰 | 申请（专利权）人： | 广州机场出入境检验检疫局综合技术服务中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510470 广东省广州市白云*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肝炎 病毒 实时 荧光 逆转录 pcr 检测 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1.一种戊型肝炎病毒实时荧光逆转录PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针，其特征在于，所述的检测引物如下所示：HEV-F1：5’-GTGCTTTTGCCTATGCTG-3’，HEV-R1：5’-GGTTGGTTGGATGAATATAGG-3’；所述的检测探针如下所示：HEV-P1：5’-AGAATCAACCCTGTCACC-3’，探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒实时荧光逆转录PCR检测引物组，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM，所述的荧光淬灭基团为BHQ-1。
3.一种含有权利要求1所述的检测引物和检测探针的检测试剂盒。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒包括10×buffer、25 mM MgCl2、10 mM dNTP mix、RT-PCR MIX、权利要求1所述的检测引物HEV-F1和HEV-R1以及检测探针HEV-P1、DEPC-ddH2O、阴性对照品和阳性对照品。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的阴性对照品为DEPC-ddH2O。
6.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照品为携带如SEQ IDNO.10所示序列的质粒。
7.一种非疾病的诊断和治疗目的的戊型肝炎病毒实时荧光逆转录PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样本总RNA作为模板，使用权利要求1所述的检测引物HEV-F1和HEV-R1以及检测探针HEV-P1，与实时荧光逆转录PCR扩增用的反应液、逆转录酶、RNaseinhibitor和Taq DNA聚合酶混合形成扩增反应体系，进行实时荧光逆转录PCR扩增，反应结束后，根据探针标记的荧光报告基团记录的荧光信号，读取并记录待测样品的Ct值，按照建立的判断标准，判断样品中是否含有戊型肝炎病毒。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述的实时荧光逆转录PCR扩增，其反应条件为：45℃ 10 min；95℃ 15 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min，40个循环；60℃时进行荧光采集。
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