[发明专利]一种高细胞生长密度微藻突变体的筛选方法有效
| 申请号： | 201710321855.8 | 申请日： | 2017-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN107058555B | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 刘建华;朱庆玲 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自军 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 生长 密度 突变体 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种高细胞生长密度微藻突变体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将抗性基因转化微藻，通过固体平板抗性筛选获得转入抗性基因序列的突变微藻的单藻落，收集各个单藻落获得微藻突变体文库；
(2)从微藻突变体文库中的每个单藻落取样，混合后在液体培养基中培养，并连续传代；
(3)每传若干代用抗性基因序列特异性的RFLP分析方法检测，当检测结果显示只剩一种微藻突变体时结束筛选，获得所述高细胞生长密度微藻突变体；当检测结果显示还剩2～5种微藻突变体时，使用固体培养基进行单藻落分离获得所述高细胞生长密度微藻突变体，
传代时接种密度为OD750为0.1～0.2，传代次数不少于30次，
步骤(3)中，每传代5～15次用抗性基因序列特异性的RFLP分析方法检测，
所述微藻为莱茵衣藻，
所述抗性基因为aadA基因、ble基因、aphⅧ基因或als基因，
RFLP分析时，先用限制性酶进行酶切，再采用Southern法检测，检测时用DIG标记的针对抗性基因的探针杂交。
2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述抗性基因为ble基因。
3.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述抗性基因转化微藻使用电转化法。
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