[发明专利]一种人肝细胞癌发生发展相关的长链非编码RNA、扩增检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种人肝细胞癌发生发展相关的长链非编码RNA、扩增检测方法及应用。本发明首次发现并克隆了一个新的长链非编码RNA基因序列，并通过实验证明该基因在肝细胞癌中的特异性表达与肝细胞癌的恶性程度及转移能力有关，该基因具有肝细胞癌辅助诊断、肝细胞癌基因治疗及肝细胞癌预后预测的用途。发明也提供了该基因的RNAi靶序列、用于RNAi干扰的短发夹片段，二者具有抑制该基因表达的能力，具有肝细胞癌的辅助诊断和基因治疗的用途。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种人肝细胞癌发生发展相关的长链非编码RNA、扩增检测方法及应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的恶性肿瘤，占整个原发性肝癌(Liver Cancer)的90％以上。全世界每年发病估计不少于一百万新患者，占恶性肿瘤发病率第6位，死亡率第2位，每年约60万人死于肝癌。据全国的几次死亡回顾调查显示我国70年代、90年代及21世纪初的肝癌在全部恶性肿瘤死亡中占前3位，是威胁健康和生命的主要疾病之一。我国HCC多发生在慢性肝炎或肝硬化的基础上，高度恶性和复杂难治；且我国人口基数大的事实，HBV、HCV感染人群的增加及人口老龄化，今后一段时间内肝癌的发生率可能仍将上升。肝癌患者的预后差，俨然已严重威胁世界和我国人民的健康和生命，也给患者家属带来了沉重的经济负担和精神压力。因此，研究HCC的发病机制、新型治疗靶点及早期诊断/预后生物标记物迫在眉睫。

长链非编码RNAs(Long non-coding RNAs，lncRNAs)是一类长度大于200nucleotides(nt)的不具备编码蛋白质能力的功能性RNA分子，其具有许多类似mRNA的结构，如poly(A)尾、5’帽子结构和启动子。它位于细胞核或者细胞质中，可被选择性剪接或聚腺苷酸化。LncRNAs曾被认为是基因转录过程中的“噪音”。但随着高通量测序和其它新兴研究技术的涌现，lncRNAs的生物学功能逐渐被研究并得到认可。越来越多的证据表明lncRNAs在广泛的生物学过程中发挥重要作用，其包含细胞生长、迁移、侵袭和分化等。然而，lncRNAs在人类肝细胞癌中的生物学功能和分子机制有待阐明。

2015年美国总统奥巴马宣布精准医学计划(Precision Medicine Initiative)的启动，引起了全世界的广泛关注。精准医学(Precision Medicine)是以个性化医疗为基础，联合最新分子遗传学检测技术对遗传物质及相关分子进行检测，这就要求我们探索更多的新型分子，以更深入、更准确和更全面地反映疾病(肝细胞癌也不例外)的本质特征，为疾病诊断和治疗以及健康管理。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种人肝细胞癌发生发展相关的长链非编码RNA、扩增检测方法及应用。

为实现本发明的上述目的，本发明采用如下的技术方案：

本发明所述人肝细胞癌发生发展相关的长链非编码RNA的序列如SEQ ID NO.1所示，将其在NCBI数据库中进行比对，发现其是在LOC105371083的基础上5’延长了86个核苷酸(catgcgtaga taaaagtaaa taaacgccct caagttagga atgaacggag gaaatgggttaaacgagaat aaataattga aggcaga)，3’增加了多聚A尾(aaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa)。该长链非编码RNA可用于制备诊断、治疗或预后预测肝细胞癌试剂或药物。该长链非编码RNA的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。用于该长链非编码RNA中siRNA的作用靶序列的序列如SEQ IDNO.7至SEQ ID NO.10任一所示。这些靶序列可用于制备诊断、治疗或预后预测肝细胞癌疾病的药物。用于该长链非编码RNA中RNAi用的短发夹片段shRNA的序列如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示。这些短发夹片段shRNA可用于制备诊断、治疗或预后预测肝细胞癌疾病的药物。以上这些序列可以进一步构建成载体或重组子。