[发明专利]用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。

技术领域

本发明涉及一种用于蓝舌病毒检测的试剂盒，特别涉及一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，还涉及其在蓝舌病毒检测中的应用，本发明属于病毒检测技术领域。

背景技术

蓝舌病(BT)是一种烈性非接触性传染病，主要经节肢动物(库蠓、伊蚊等) 传播，可感染反刍动物如牛、绵羊、山羊、鹿、非洲羚羊、骆驼等。世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。BTV广泛分布于热带、亚热带地区，BTV血清型众多，目前至少有27个血清型，新发现的28型和 29型正在检测中。通过BT流行病学调查，中国共在31个省、市(区)发现BTV 血清阳性家畜，并从云南、湖北和安徽等地自然感染羊体中分离获得BTV，已检测出BTV-1、BTV-2、BTV-3、BTV-4、BTV-5、BTV-7、BTV-12、BTV-15、BTV-16、 BTV-24十种血清型。

BTV(Bluetongue disease virus,BTV)是由10个基因片段组成的双股RNA病毒，分别编码7个结构蛋白(VP1-VP7)和4个非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a、 NS4)。VP2蛋白是BTV外壳蛋白的主要成分，同时是BTV血清型的主要决定因素。 VP2蛋白为型特异性蛋白，可以用来区别BTV各血清型间的不同。

竞争ELISA(C-ELISA)是检测蓝舌病抗体的一种常用方法。C-ELISA方法可用于多种动物血清抗原检测，其特异性、敏感性高、成本低，广泛的用于临床检测蓝舌病检测中。

本发明采用针对4型BTV VP2的型特异性单克隆抗体作为竞争性抗体与待检测抗体竞争，通过抑制率大小来判断样品血清的来源动物是否感染BTV，从而建立了用于快速、敏感的BTV型特异性检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题的技术问题是提供一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其在BTV型特异性检测中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，包括以下两组组分：

组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生，所述的杂交瘤细胞株1B6保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCCNo.C2016107；所述的蓝舌病病毒抗原I为蓝舌病病毒4型 VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段；

组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A-1G7分泌产生，所述的杂交瘤细胞株4A-1G7保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCCNo.C201757；所述的蓝舌病病毒抗原II为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.2所示抗原表位的VP2蛋白的片段。

在本发明所述的竞争ELISA检测试剂盒中，优选的，所述试剂盒还包括抗鼠的酶标二抗、阴性对照、阳性对照、稀释液、TMB显色液、洗涤液和终止液。