[发明专利]用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于包括以下两组组分：

组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生，所述的杂交瘤细胞株1B6保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCC No.C2016107；所述的蓝舌病病毒抗原I为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段；

组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A-1G7分泌产生，所述的杂交瘤细胞株4A-1G7保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCCNo.C201757；所述的蓝舌病病毒抗原II为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.2所示抗原表位的VP2蛋白的片段。

2.如权利要求1所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括抗鼠的酶标二抗、阴性对照、阳性对照、稀释液、TMB显色液、洗涤液和终止液。

3.如权利要求2所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的抗鼠的酶标二抗为HRP标记的山羊抗鼠IgG。

4.如权利要求2所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为蓝舌病病毒阴性血清；所述阳性对照为蓝舌病病毒4型阳性血清；所述稀释液为含有5w/v％脱脂乳的PBS缓冲液；所述洗涤液为PBS缓冲液。

5.如权利要求4所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的PBS缓冲液中包括NaCl 8g，KCl 0.2g，Na₂HP0₄ 1.44g，KH₂PO₄ 0.24g，溶解后pH值调为7.4，用去离子水定容至1000mL。

6.如权利要求1所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的含有SEQ ID NO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段由Genbank登录号为132566356的4型BTV的L2基因的976-1980bp的核苷酸序列编码；所述的有SEQ ID NO.2所示抗原表位的VP2蛋白的片段由Genbank登录号为132566356的4型BTV的L2基因的1-1203bp的核苷酸序列编码。

7.如权利要求1所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，用于蓝舌病病毒型特异性检测时，分别采用组分I和组分II进行竞争ELISA检测，根据检测结果进行判断：如果两种方法检测结果均为阳性，则待检样品为BTV-4、BTV-18或BTV-20感染的样品；如果两种方法检测结果均为阴性，则待检样品为BTV-1、BTV-2、BTV-6、BTV-7、BTV-8、BTV-10、BTV-15或BTV-23感染的样品；如果组分II C-ELISA方法结果为阳性而组分I C-ELISA方法结果为阴性，则待检样品为BTV-3、BTV-11、BTV-13、BTV-16、BTV-19、BTV-22或BTV-24感染的样品；如果组分II C-ELISA方法结果为阴性而组分I C-ELISA方法结果为阳性，则待检样品为BTV-5、BTV-9、BTV-12、BTV-14、BTV-17或BTV-21感染的样品。

8.如权利要求1-7任一项所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，采用组分I或组分II进行竞争ELISA检测时，按照以下方法进行：

(1)取出包被蓝舌病病毒抗原I或包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板，以洗涤液洗板；

(2)加入稀释液稀释的待测血清和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I或用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，37℃孵育；同时以分别加入稀释液稀释的阴性或阳性血清的孔作为对照；

(3)以洗涤液洗板，加入抗鼠的酶标二抗，37℃孵育；

(4)以洗涤液洗板，加入TMB显色液，37℃显色，最后加终止液终止反应，测定OD值。