[发明专利]一种裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法有效
| 申请号： | 201710318412.3 | 申请日： | 2017-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN107034185B | 公开（公告）日： | 2021-05-07 |
| 发明（设计）人： | 崔淑芳;丛薇;李周桐;杨文静;余琛琳;赵善民;林丽芳;程继帅;刘攀;徐晨 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 赵青 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鼹鼠 骨髓 间充质 干细胞 分离 培养 方法 | ||
1.一种裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、用洗涤液冲洗成年裸鼹鼠的骨髓腔，获得骨髓冲出液；所述洗涤液的组成为：PBS溶液，加入0.005％-0.02％(W/V)Dnase I；
B、将骨髓冲出液，过细胞筛，制成单细胞悬液；
C、将步骤B得到的单细胞悬液，离心弃上清，收集细胞沉淀；
D、将步骤C得到的细胞沉淀加入1-3mL红细胞裂解液重悬，裂解红细胞1-2min，加等体积终止液，终止裂解，离心后弃上清；所述终止液的组成为：低糖DMEM培养基、5％-15％(V/V)FBS、0.5％-2％(V/V)PS双抗、0.005％-0.02％(W/V)Dnase I；
E、用培养液将步骤D处理后的细胞沉淀重新制成细胞悬液，按照2×105/cm2接种于培养皿中；所述培养液的组成为：低糖DMEM培养基、10％-20％(V/V)FBS、0.5％-2％(V/V)PS双抗、0.005％-0.02％(W/V)Dnase I；
F、在33-37℃、10-15％O2、3-5％CO2的环境中培养48-72h，半量换培养液，继续培养36-48小时，全量换培养液，此后隔天换液，直到细胞融合达80％，进行传代培养；所述培养液的组成为：低糖DMEM培养基、10％-20％(V/V)FBS、0.5％-2％(V/V)PS双抗、0.005％-0.02％(W/V)Dnase I。
2.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤A所述洗涤液的组成为：PBS溶液，0.01％(W/V)Dnase I。
3.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤B所述细胞筛为200目细胞筛。
4.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤C所述离心为100g离心5min弃上清，收集细胞沉淀。
5.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤D所述终止液的组成为：低糖DMEM培养基、10％(V/V)FBS、1％(V/V)PS双抗、0.01％(W/V)Dnase I。
6.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤E和步骤F所述培养液的组成为：低糖DMEM培养基、15％(V/V)FBS、1％(V/V)PS双抗、0.01％(W/V)Dnase I。
7.根据权利要求1所述的裸鼹鼠骨髓间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，步骤F在35℃、12％O2、5％CO2的环境中培养72h，半量换培养液，继续培养48小时，全量换培养液。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军第二军医大学，未经中国人民解放军第二军医大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710318412.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
