[发明专利]用于获得非变应性蜂胶的方法

说明书

本发明涉及用于获得蜂胶衍生物的方法，所述蜂胶衍生物中变应原性物质的含量降低，从而使得其大量使用而对人健康没有禁忌症；处理生蜂胶(raw propolis) 或其衍生物的方法；以及有利地用于营养保健(nutraceutic)和美容领域的蜂胶水醇性衍生物。

由蜜蜂((Apis mellifera))产生的蜂胶得自植物树皮和叶芽(例如，杨树、山毛榉、桦树、栗树、松树等)的树脂渗出物，蜜蜂通过其唾液分泌和添加蜡来对所述渗出物进行采集和处理。

在室温下，蜂胶表现为粘性的可塑性物质，具有芳香气味和取决于植物来源的不同颜色。蜂胶的化学组成取决于树脂渗出物的植物来源，以及来源地区和采集季节。来自杨属(Populus genus)植物的蜂胶由树脂(20％～55％)、蜡(30％～40 ％)、挥发油(5％～10％)和多种酚类化合物(10％～30％)(尤其是包含类黄酮)组成。酚部分还包含苯烷基酸(例如，肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸和对香豆酸)及其一些酯。

由于其中一些组分，蜂胶具有多种生物和药理特性，包括抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗炎、抗氧化、免疫刺激、止龋(cariostatic)、抗肿瘤和抗幽门螺旋菌 (Helicobacter pylori)活性(L G.Coelho等，″Brazilian green propolis on Helicobacter pylori infection.A pilot clinical study″，Helicobacter vol.12：572-4(2007))。

对于这些特性，长久以来，已知在常用药中使用基于蜂胶的制剂，并且主要应用涉及治疗呼吸道感染、流感、痤疮、创伤、烧伤、疱疹、牙龈炎和口炎以及预防龋齿。蜂胶还用于美容领域用于配制霜剂、软膏剂、洗发剂、洗剂、凝胶剂等。

但是，除多种有益作用外，使用蜂胶可在特别敏感的人群中引起一些不希望的作用，例如口干、轻度胃紊乱和变应性皮肤反应(变应性接触性皮炎)(Contact dermatitis，Vol.17：163(1987)；Pediatr.Dermatol.Vol.22：1(2005)； Contact dermatitis，Vol.51：255(2004))。

近期研究(F.Giusti，″Sensitization to propolis in 1255 children undergoing patch testing″；Contact Dermatitis，Vol 51：255-258(2004)) 表明，这些变态反应可归因于定义明确的蜂胶组分的混合物，称为LB-1，其由咖啡酸及其通式(1)的一些酯组成。

其中，R可以是：3-甲基-2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、苄基和苯乙基。

这些化合物以不同百分比存在于LB-1级分中，例如3-甲基-2-丁烯基咖啡酸酯(54％)、3-甲基-3-丁烯基咖啡酸酯(28％)、2-甲基-2-丁烯基咖啡酸酯(4％)、咖啡酸苯乙酯(8％)、咖啡酸苄酯(1％)和咖啡酸(1％)(DeGrootA.C.，Weyl和J.W.， Nater J.P.，Unwanted effects of cosmetics and drugs used in dermatology， pp.770，Elsevier，NY，1994)。如Food Chem.Toxicology，Vol.36：34763(1998) 中所报道的那样，在这些化合物中，3-甲基-2-丁烯基咖啡酯表现出最大的变应原性作用。

蜂胶还包含3-甲氧基咖啡酸(或阿魏酸)和3，4-二甲氧基咖啡酸酯，但并不认为它们具有变应原活性(Contact Dermatitis，Vol.23：274-75，(1990))。

为了消除蜂胶的变态反应，已提出了一些方法，例如专利文件WO2009/133073 所述的方法，其中公开了用于获得有效的低变应原性蜂胶提取物的化学或物理化学方法。该方法包括一系列步骤，包括在高于25℃的温度下用溶剂(例如，醇与水的混合物)进行蜂胶提取，在等于室温的反应温度下进行对不溶性物质的第一分离，在低于0℃的温度下进行对不溶性物质的第二分离，以及除去提取介质。然而，该方法有一些缺点。首先，工作时间通常较长，尤其是因为通过该方法提供的温度下降必须逐渐地发生，以允许使基本上不溶的物质形成和定量沉淀，从而需要进行仔细和准确的监测。因而，需要在温度控制中保证高准确性的设备和/或植物。