[发明专利]一种细胞培养基和诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法

说明书

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种细胞培养基和诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能。目前已在多种如羊膜、骨髓、脐带、肌肉组织、脂肪组织、脐血和牙髓等成熟组织中成功分离并培养出间充质干细胞。羊膜是胎盘包裹胎儿面的一层半透明膜，其表面没有神经、血管、肌肉和淋巴等组织，可从中分离出羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞。早在50多年前，科学家和临床医生们就已经认识到羊膜拥有一定的生物学作用。早期羊膜曾被用作覆盖皮肤伤口的敷料，可以抗感染、减轻炎症的发生，并且抑制细胞的免疫反应，还可以刺激血管的生成，这些特点使它在多种疾病的辅助治疗中得到了较为广泛的应用。

人胎盘羊膜来源的间充质干细胞(human amnion mesenchymal cells,hAMSCs)来自于原条期的胚外中胚层，在一定条件下具有向多个细胞系分化的潜能，向内胚层分化，如肝细胞、胰岛样细胞；向中胚层分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞；向外胚层分化，如神经细胞等。hAMSCs不仅具有干细胞的特征，还有不排斥性及免疫效果，是细胞移植和组织工程的理想种子细胞。

脂肪细胞应用于美容修复软组织缺损具有可塑性强、可适应不同缺损形状的优势，hAMSCs的成脂诱导潜能，可使其成为美容修复软组织缺损的干细胞来源。因此，hAMSCs的成脂分化是目前再生医学和组织工程领域的研究热点之一，脂肪组织再生技术是重建和修复由老化和病理因素等导致的脂肪组织丢失和损伤的重要技术手段，脂肪细胞作为脂肪再生工程的种子细胞来源， 可大大地驱动新生组织的重建。因此，研发一种新型的诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种细胞培养基和诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法，分化周期短。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种细胞培养基，包含：罗格列酮、吡格列酮、胎牛血清、胰岛素和基础培养基。

优选的，所述罗格列酮的工作浓度为0.1～1.0mM。

优选的，所述吡格列酮的工作浓度为5～15μM。

优选的，所述胰岛素的工作浓度为5mg/L。

优选的，每100mL所述基础培养基中包含5mL胎牛血清。

优选的，所述基础培养基为DMEM-H。

本发明还提供了一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法，采用上述细胞培养基诱导培养羊膜间充质干细胞，获得脂肪细胞。

优选的，所述羊膜间充质干细胞为第三代至第五代羊膜间充质干细胞。

优选的，所述诱导培养的条件为37℃、5％CO₂。

优选的，所述诱导培养的时间为14～21天。

综上所述，本发明提供了一种细胞培养基和诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法，所述培养基包含罗格列酮、吡格列酮、胎牛血清、胰岛素和基础培养基，各组分安全无毒害、配伍合理、协同增效，可促进间充质干细胞脂向分化，将其应用于诱导羊膜间充质干细胞成脂分化，可大大缩短分化时间，提高分化效率。采用上述细胞培养基诱导培养羊膜间充质干细胞，能够成功实现对羊膜间充质干细胞成脂分化，其成脂效果明显优于传统使用地塞米松、胰岛素和异丁基甲基黄嘌呤等组成的诱导培养基。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实 施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为实施例1中羊膜间充质干细胞(hAMSCs)表面标记的鉴定结果；

图2a为实施例2的对照组1中培养至第14天的hAMSCs的油红染色效果图；

图2b为实施例2的对照组1中培养至第21天的hAMSCs的油红染色效果图；

图2c为实施例2的对照组2中培养至第14天的hAMSCs的油红染色效果图；

图2d为实施例2的对照组2中培养至第21天的hAMSCs的油红染色效果图；

图2e为实施例2的实验组1中培养至第14天的hAMSCs的油红染色效果图；

图2f为实施例2的实验组1中培养至第21天的hAMSCs的油红染色效果图；