[发明专利]一种尿激酶的分离纯化方法有效
申请号: | 201710311962.2 | 申请日: | 2017-05-05 |
公开(公告)号: | CN106929497B | 公开(公告)日: | 2018-04-17 |
发明(设计)人: | 李尔华;顾京;李争 | 申请(专利权)人: | 江苏尤里卡生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/72 | 分类号: | C12N9/72;A61K38/49;A61P7/02 |
代理公司: | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470 | 代理人: | 刘晔 |
地址: | 211200 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 尿激酶 分离 纯化 方法 | ||
1.一种尿激酶的分离纯化方法,其包括如下步骤:
1)尿激酶粗品的制备
2)尿激酶的纯化
所述的步骤2)包括如下步骤:
将步骤1)制得的尿激酶粗品溶解后的澄清液以80mL/min的速度经CM-葡聚糖微球柱进行纯化;所述澄清液与柱体积比为15:1;
所述澄清液经CM-葡聚糖微球柱后利用0.2M NaCl、PH6.5-6.7的磷酸缓冲液进行洗脱。
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法,所述步骤1)尿激酶粗品的制备方法,具体步骤如下:
a)男性尿液,在10℃以下,调节 pH8.5,静置2小时,弃去沉淀,得上清液;
b)取上清液,调pH5.0-5.5酸化,得酸化尿,通过硅藻土柱进行吸附;
c)5℃冷水洗柱,以0.02% 氨水和氯化钠进行洗脱,得洗脱液1;
d) 洗脱液1于pH4-5的条件下上CM-C柱,然后用PH11.5-11.8的氨水和氯化钠溶液进行洗脱,得洗脱液2,洗脱液2冻干即得尿激酶粗品。
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