[发明专利]一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法

权利要求书

1.一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将两组不同生理或病理条件的整体蛋白分别作为控制组与疾病组；

(2)将还原及烷基化后的控制组蛋白质与疾病组蛋白质任意位置赖氨酸及N端氨基酸上的所有氨基进行全同重二乙基标记，分别标记为-N(¹³CH₃¹³CHD)₂和-N(CD₃CH₂)₂，其质量差异为11.68mDa；

(3)同重标记后两组蛋白按等比例混合进行高分辨质谱和串级质谱分析得到一个数据组；

(4)对数据组进行定性、定量数据库搜索，得到蛋白质的ID及疾病组每一个蛋白质相对于控制组的相对比例，即疾病条件下所有蛋白的上调或下调情况，上调或下调倍数最大的蛋白即为与该疾病发生、发展相关的蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤(2)中，一组蛋白质任意位置赖氨酸及N端氨基酸上的所有氨基用乙醛¹³CH₃¹³CHO和氘代氰基硼氢化钠NaBD₃CN标记，另一组蛋白质任意位置赖氨酸及N端氨基酸上的所有氨基用乙醛CD₃CHO和氰基硼氢化钠NaBH₃CN标记。

3.根据权利要求2所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，进行标记的反应过程和条件如下：

还原及烷基化后的蛋白重新溶解在乙酸钠缓冲溶液后，加入刚刚配制的4％(v/v)乙醛溶液；在搅拌条件下加入600mM的新配制的氰基硼氢化钠溶液，室温反应1小时后，反应用4％(v/v)的氨水淬灭。

4.根据权利要求3所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，所述的乙酸钠缓冲溶液为100mmol/L，pH为5-6。

5.根据权利要求1所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，用二硫苏糖醇对控制组蛋白质与疾病组蛋白质进行还原。

6.根据权利要求1所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，用碘乙酰胺对控制组蛋白质与疾病组蛋白质进行烷基化。

7.根据权利要求1所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤(3)所述的等比例混合指：按照控制组与疾病组的重量、体积或摩尔量以1:1比例进行混合。

8.根据权利要求1所述的一种基于全准同重二乙基标记的蛋白质定量方法，其特征在于，步骤(4)中，用ProteinGoggle对数据组进行定性、定量数据库搜索。