[发明专利]猪2细胞胚胎体积的测量方法

说明书

一种猪2细胞胚胎体积的测量方法。猪是重要的经济动物，其生殖调控研究既可以为人类生殖生理和病理过程研究提供参考，又可以为提高猪的繁殖性能提供理论依据，然而,繁殖力低下是目前困扰我国养猪业生产的一个难题。一种猪2细胞胚胎体积的测量方法，通过在显微镜下对猪2细胞胚胎进行拍照并测量，制作回归曲线，得到回归方程，然后通过简单拍照并测量，即可得到较为精确的胚胎体积，有利于进一步研究提高猪胚胎的发育潜能，提升猪生产效率，是一个鉴定高质量胚胎的可靠方法。本发明应用于胚胎工程技术领域。

技术领域：

本发明涉及一种猪2细胞胚胎体积的测量方法。

背景技术：

猪是重要的经济动物，也是生物医学模型动物，其生殖调控研究既可以为人类生殖生理和病理过程研究提供参考，又可以为提高猪的繁殖性能提供理论依据。然而,繁殖力低下是目前困扰我国养猪业生产的一个难题。繁殖力低体现在各个阶段，包括卵减数分裂成熟率低、受精后早期胚胎发育率低、妊娠率及活仔率低等。其中，猪卵成熟和早期胚胎发育过程中的高比率损失已成为一个重要问题，因此，提高猪卵母细胞的发育潜能，对于提升猪生产效率来说，具有重要意义。为了提高人类体外受精(in vitro fertilization, IVF)的成功率，通常移植数枚胚胎，但这样会增加多重受孕的危险。在移植单卵的情况下，为了提高成功率，则需要一个鉴定高量胚胎的可靠方法。以往的评分系统都是以形态学指标为基础的，包括原核形态学，卵裂率，卵裂球数量和形态等，这些指标与胚胎活力有密切关系。胚胎初次卵裂时间也是一个挑选用来移植或冷冻的高质量胚胎的标准。一般认为卵裂球体积越大，发育能力越强。

现有的测量方法是直径估算法（如图1所示），但是该方法对猪2细胞胚胎体积的估算不够准确，此外，同一胚胎在旋转90度后，观察到的体积会有较大变化（如图2所示）。故有必要研发一种新的有效测量猪2细胞胚胎体积的方法，有助于评估猪卵母细胞的发育潜能。

发明内容：

本发明的目的是提供一种猪2细胞胚胎体积的测量方法。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

一种猪2细胞胚胎体积的测量方法，其组成包括：猪2细胞，该方法包括如下步骤：

（1）制作回归曲线

A、将2细胞卵裂胚胎染色，将极体置于胚胎12点钟位置，在显微镜下拍照，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX1、左边细胞长度LY1、右边细胞宽度RX1、右边细胞长度RY1；

B、沿卵裂沟方向旋转90度，将极体旋转至胚胎上方，拍摄第2张照片，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX2、左边细胞长度LY2、右边细胞宽度RX2、右边细胞长度RY2；

C、由步骤A、B测量取得的LX1、LX2、LY1、LY2、RX1、RX2、RY1、RY2按照椭圆体计算得出左边细胞和右边细胞的体积；

D、然后用链酶蛋白酶去除透明带，分离2细胞，在显微镜下拍照，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX、左边细胞长度LY、右边细胞宽度RX、右边细胞长度RY；

E、由步骤D测量取得的LX、RX、LY、RY计算得出左边细胞和右边细胞的体积；

F、步骤C计算得出左边细胞和右边细胞的体积认为是估计值，步骤E计算得出左边细胞和右边细胞的体积认为是实际值，按照上述方法测量10枚胚胎，计算取得回归曲线，得到回归方程；

（2）测量猪2细胞胚胎两个细胞的体积，并计算预估体积：

经过步骤A、B的测量并根据回归方程计算，不用去除透明带就可以得出猪2细胞胚胎体积，用于后续活体培养，评估胚胎发育能力。