[发明专利]猪2细胞胚胎体积的测量方法

权利要求书

1.一种猪2细胞胚胎体积的测量方法，其组成包括：猪2细胞，其特征是：该方法包括如下步骤：

（1）制作回归曲线

A、将2细胞卵裂胚胎染色，将极体置于胚胎12点钟位置，在显微镜下拍照，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX1、左边细胞长度LY1、右边细胞宽度RX1、右边细胞长度RY1；

B、沿卵裂沟方向旋转90度，将极体旋转至胚胎上方，拍摄第2张照片，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX2、左边细胞长度LY2、右边细胞宽度RX2、右边细胞长度RY2；

C、由步骤A、B测量取得的LX1、LX2、LY1、LY2、RX1、RX2、RY1、RY2按照椭圆体计算得出左边细胞和右边细胞的体积；

D、然后用链酶蛋白酶去除透明带，分离2细胞，在显微镜下拍照，用矩形框架校正测量数据边缘然后测量长度，分别得到左边细胞宽度LX、左边细胞长度LY、右边细胞宽度RX、右边细胞长度RY；

E、由步骤D测量取得的LX、RX、LY、RY计算得出左边细胞和右边细胞的体积；所述的去透明带后，细胞形态认为是球体，计算得出左边细胞和右边细胞的体积，公式为：测量体积=1/6×π×[（X+Y）/2]3；

F、步骤C计算得出左边细胞和右边细胞的体积认为是估计值，步骤E计算得出左边细胞和右边细胞的体积认为是实际值，按照上述方法测量10枚胚胎，计算取得回归曲线，得到回归方程；

（2）测量猪2细胞胚胎两个细胞的体积，并计算预估体积：

经过步骤A、B的测量并根据回归方程计算，不用去除透明带就可以得出猪2细胞胚胎体积，用于后续活体培养，评估胚胎发育能力；

所述的胚胎染色剂为Hoechst 33342；

所述的步骤A、B、 D中，拍照时，连续五次聚焦照片确保取得长度最大值；

所述的步骤D 中，当分离2细胞后，若2细胞大小较为接近，去除透明带时为了防止混淆左侧细胞和右侧细胞，用持卵针在左侧细胞稍微用力吸出一个小突起，分离后可以辨认，放入二氧化碳培养箱恢复1小时，每隔20分钟检查和翻动细胞，防止细胞变为扁平，待其变为球体，在显微镜下拍照；

所述的去透明带前，细胞形态认为是接近椭圆体，计算得出左边细胞和右边细胞的体积，公式为：测量体积=（X1+X2）/2×Y1×Y2×1/6×π。