[发明专利]一种拟茎点霉及其次生代谢产物中新甾体类化合物的分离应用

说明书

本发明属于医药技术领域，提供了一种拟茎点霉TJ507a(Phomopsis sp.TJ507a)菌株，保藏于位于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016651，本发明从该菌株次生代谢产物中分离纯化制备得到了两个新甾体类化合物青拟甾酮A(Phomopsterone A)和青拟甾酮B(Phomopsterone B)，所得化合物具有对NO合成酶以及RAW264.7细胞抑制活性，为开发新的抑制NO合成酶的抗炎药物提供了候选化合物。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及从拟茎点霉菌株中分离制备新甾体类化合物的方法，具 体涉及一种拟茎点霉及其次生代谢产物中新甾体类化合物的分离应用。

背景技术

炎症是一种常见的病理反应，可能引起一系列严重的并发症，甚至威胁生命安全。一氧 化氮(NO)在人体内扮演着传递重要讯息和调节细胞功能的角色。作为生物体内一种重要的 信号分子，NO参与免疫反应、神经传导等多种生理功能的调节。内源性的NO是由一氧化氮 合酶(NOS)催化氧化L-精氨酸产生。研究表明，过量的NO引起会DNA损伤、线粒体呼吸抑制等，特别是NO与超氧负离子形成过氧亚硝酸盐阴离子等活性氮，对关键蛋白进行氮化修饰，进而改变信号途径，间接和直接介导NO的细胞毒性效应；此外多重级联信号被活化，这些信号通路之间又相互影响，形成炎症级联瀑布反应，推动炎症发展，导致多种疾病，如败血性休克、哮喘、炎症性肠病、癌症等。对于由NO生成过多而导致的疾病，开发NOS 抑制剂作为抗炎新药应用于临床将取得良好的治疗效果。

植物内生菌几乎存在于所有的植物中，是产生结构新颖及重要药理活性次生代谢产物的 主要来源之一。因此，从植物内生菌中筛选具有抗炎作用的新的天然产物具有非常重要的意 义。

本发明的目的是提供一种拟茎点霉菌株。本发明得另一个目的是提供从该茎点霉菌株的次生代 谢产物中分离制备得到的新甾体类化合物以及分离制备方法，以及所得新甾体类化合物的应 用。

实现本发明的技术方案是；本发明提供的拟茎点霉菌株是于2016年11月17日保藏于中 国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉市武汉大学)，名称为：拟茎点霉TJ507a(Phomopsis sp.TJ507a)；保藏编号：CCTCC NO：M2016651。

本发明从从上述保藏的拟茎点霉TJ507a(Phomopsis sp.TJ507a)菌株中分离纯化制备得 到以下式(1)所示新甾体类化合物化合物(化合物1、化合物2)，

化合物1：青拟甾酮A(Phomopsterone A)

化合物2：青拟甾酮B(Phomopsterone B)

式(1)

具体分离纯化制备方法包括以下步骤：

S1.种子培养基的制备：将权利要求1所述的拟茎点霉TJ507a(Phomopsissp.TJ507a) 菌株接入种子培养基，恒温箱培养，得到种子培养基；所述恒温箱培养的条件为：28℃，培 养时间为5～7天；所述种子培养基的组分为：马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15～20g,自 来水1000mL；

S2.接种：采用固体发酵方式，在发酵瓶中加入大米固体发酵培养基，接种S1中种子培 养基，静置培养；所述大米固体发酵培养基为每1L的三角锥形瓶中加入大米200g，水200 mL；所述静置培养的时间为28～30天，培养温度为25～28℃；

S3.将S2发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取，减压浓缩回收甲醇，然后用乙酸乙酯 -水萃取，得到乙酸乙酯浸膏；

S4.将S3所得浸膏经层析分离，得到式(1)中所示化合物1、化合物2；所述层析分离方法包括硅胶柱层析，凝胶柱层析，高效液相色谱。