[发明专利]一种检测鸡CDS2基因3’-UTR变异的方法

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种检测鸡CDS2基因3’‑UTR变异的方法。步骤如下：资源群体样品的准备；样品基因组DNA的提取；DNA混合池的构建；引物的设计；3’‑UTR变异的检测；统计检测结果并进行基因型判型，揭示了CDS2基因在鸡的生长发育方面存在着重要的效应，通过选择淘汰CDS2基因G4971A位点的AG杂合子，有利于提高群体的6周龄体重和腿肌重，具有作为鸡的育种中利用基因型进行鸡的体重选择的应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种检测鸡CDS2基因3’-UTR变异的方法。

背景技术

CDP-甘油三酯合成酶(CDP-diacylglycerol synthases，CDS)是催化磷脂酸形成CDP-甘油三酯(CDP-DAG)的关键酶。而磷脂酸和CDP-DAG在细胞功能中都起着重要的作用。磷脂酸在一些信号传导通径中发挥作用，而且在结构和生物合成中也发挥着作用。而CDP-DAG是磷脂酰肌醇(PI)，磷脂酰甘油(PG)，和心磷脂(CL)等磷脂物质的脂质前体。目前两种CDS被鉴定CDS1和CDS2。CDS2广泛表达，被发现在几乎所有组织显示其对机体具有重要功能。CDS2是一个蛋白编码基因，其通路与代谢和甘油磷脂生物合成有关，Go分析将这个基因与转移酶活力、转移含磷基团和磷酸二胞苷酰基转移酶等功能联系起来。显示该基因在能量代谢等方面的功能。在斑马鱼，干扰了CDS2导致减少了血管生长因子(VEGFA)信号的水平和血管再生，主要通过降低PIP2的再生水平。目前关于鸡CDS2的研究尚未见报道。

发明内容

本发明为解决揭示通过鸡CDS2基因的基因型选择提高鸡的体重的技术问题，公开了一种检测鸡CDS2基因3’-UTR变异的方法。

为解决上述技术问题，采用以下技术方案：

一种检测鸡CDS2基因3’-UTR变异的方法，步骤如下：

(1)资源群体样品的准备；

(2)样品基因组DNA的提取；

(3)DNA混合池的构建；

(4)引物的设计；

(5)3’-UTR变异的检测；

(6)统计检测结果并进行基因型判型。

所述步骤(1)的操作为，采用正交试验法，正交系4个、反交系3个，F₀代是从蛋肉兼用型固始鸡和肉用型安卡红鸡纯系中分别选取种鸡，F₀代固始鸡和安卡红鸡是两种生长速度不同的种鸡，按公母鸡1∶6比例配组而成；从每个家系F₁后代中选留1只公鸡，每只公鸡分别按公母鸡1∶9比例与选留公鸡不同的F₁代家系的F₁代母鸡交配，产生F₂代，以F₂代个体为样品。

所述步骤(2)的操作为，采用酚氯仿抽提法从F₂代个体样品的血液中提取基因组DNA。

所述步骤(3)的操作为，选取100个不同个体的F₂代样品的DNA，每个样品的DNA取2μL，充分混匀即可完成DNA混合池的制备。

所述步骤(4)中，引物为检测变异位点的引物对LP5-F和LP5-R，LP5-F序列如SEQID NO：1所示，LP5-R序列如SEQ ID NO：2所示。

所述步骤(5)中，3’-UTR变异的检测包括PCR产物检测和酶切片段检测。

所述酶切片段检测采用的酶切引物对为LP6-F和LP6-R，其中LP6-F序列如SEQ IDNO：3所示，LP6-R序列如SEQ ID NO：4所示。