[发明专利]一种基于重组枯草杆菌纤溶酶的冻干粉针剂及其制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种冻干粉针剂及其制备工艺，具体是一种基于重组枯草杆菌纤溶酶QK的冻干粉针剂及其制备工艺，属于药物制剂技术领域。

背景技术

全世界每年直接和间接死于心脑血管疾病的人数约占世界总死亡人数的1/3，已成为人类健康的头号杀手。而血栓是导致心脑血管疾病的最主要原因。因此，溶栓是治疗心脑血管疾病的关键。

目前市场上溶栓产品主要分为两大类：一类是应用范围较广的以尿激酶、链激酶和t-PA(组织型纤溶酶原激活剂)为代表的间接溶栓药物，其通过激活体内纤溶酶原转化为纤溶酶发挥溶栓功效，但这类药物价格昂贵，出血率高，半衰期短(以分钟计算)；另一类是以从蚯蚓中提取的蚓激酶和从蛇毒中提取的溶纤酶为代表的纤溶酶类似蛋白，其可直接溶解血栓中的纤维蛋白，但无特异性，毒副作用过大，应用范围较小。因此，开发具有溶栓功效、适合长期口服使用、价格低廉，且安全无毒副作用的溶栓药物将极大提高心脑血管病人的存活率和治愈率。

纳豆激酶是日本科学家在1987年首次从大豆发酵食物纳豆中分离得到的第一个枯草杆菌纤溶酶。大量研究表明，纳豆激酶与血栓中的交联纤维蛋白具有极高的亲和性，能够直接特异性地降解纤维蛋白，还可以通过其它途径达到间接溶栓的效果。此外，更重要的一点是，该酶具有非常好的安全性，基本不会引起毒副作用。然而，不管是枯草芽胞杆菌固体发酵还是液体发酵，得到的纤溶酶含量均不高，且蛋白成分复杂，纯化成本极其高昂。

发明内容

针对上述现有技术存在的技术问题，本发明提供一种基于重组枯草杆菌纤溶酶的冻干粉针剂及其制备工艺，该QK冻干粉针剂，能够直接特异性地降解纤维蛋白，还可以通过其它途径达到间接溶栓的效果，安全且基本不会引起毒副作用。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：一种基于重组枯草杆菌纤溶酶的冻干粉针剂，其特征在于：所述冻干粉针剂包括重组枯草杆菌纤溶酶和赋形剂。

进一步，所述赋形剂为甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖或甘氨酸的一种。

进一步，所述赋形剂为甘露醇，添加浓度为0.5-2％。

进一步，所述甘露醇的添加浓度为：1％。

一种基于重组枯草杆菌纤溶酶冻干粉针剂的制备工艺，所述制备工艺包为：向重组枯草杆菌纤溶酶原液中加入处方量的甘露醇，搅拌溶解后过滤，分装，冻干。

优选地，所述冻干过程包括：先进行预冻，在一定温度下保持数小时；然后，每升温5℃，再保持一定时间；最后，升温至预定温度并保温。

本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明提供的重组枯草杆菌纤溶酶QK冻干粉针剂成品率高且外观疏松均匀，安全稳定；此外，本发明提供的制备工艺简单，易行，适合工业大规模生产。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种基于重组枯草杆菌纤溶酶的冻干粉针剂，所述冻干粉针剂包括重组枯草杆菌纤溶酶和赋形剂。

所述赋形剂为甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖或甘氨酸的一种。所述赋形剂为甘露醇，添加浓度为0.5-2％。优选甘露醇的添加浓度为：1％。

一种基于重组枯草杆菌纤溶酶冻干粉针剂的制备工艺，所述制备工艺包括：1)向重组枯草杆菌纤溶酶QK原液中加入处方量的甘露醇，充分搅拌溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤；2)溶液分装于10ml规格的西林瓶中，每瓶的装样量为3ml；3)将灌装好的产品进行冻干，压塞即得所述的重组枯草杆菌纤溶酶QK冻干粉针剂，其中，所述冻干过程如下：先将灌装好的产品进行预冻，-35℃保持3小时；然后每升温5℃保持1.5小时；最后升温至30℃并保温3小时。

实施例一：

本实施例是基于从上千株菌种中筛选得到一株高表达纤溶酶的枯草芽胞杆菌Bacillus Subtilis QK，表达分泌的纤溶酶命名为枯草杆菌纤溶酶QK；通过基因工程技术进行QK基因优化，构建表达载体，并在毕赤酵母中实现了高效表达，再经过简单、高效的分离纯化工艺可得到纯度高于98％的重组枯草杆菌纤溶酶QK。

重组枯草杆菌纤溶酶QK原液1000mL