[发明专利]一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器的构建

说明书

本发明涉及一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器的构建，首先将金电极进行抛光、清洗，及活化处理，通过金硫键作用将捕获DNA组装于电极表面，并用MCH封闭电极表面非特异性结合位点；随后通过静电作用吸附多肽链，并在HATp300作用下对多肽链进行乙酰化处理，使之脱离电极表面；其次电极于含有两种发夹DNA的杂交链溶液中进行杂交链反应，以及银簇的还原；最后组装好的电化学发光生物传感器于溶液中进行电化学发光信号检测。该ECL生物传感器在HAT p300的定量分析，以及复杂的细胞裂解液中HAT p300活性分析上都存在显著优势。

技术领域

本发明属于电化学发光生物传感器领域，具体涉及一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器的构建。

背景技术

组蛋白被修饰所引起的染色质结构的改变，在真核生物基因表达调控中发挥着重要作用。组蛋白修饰可包括甲基化、磷酸化、泛素化和乙酰化等。其中乙酰化为最主要的修饰方法，组蛋白乙酰转移酶(HAT)则是调节组蛋白和转录因子乙酰化修饰水平的关键酶，它使得染色质结构松散、激活转录。HAT催化的组蛋白乙酰化在生物化学以及药理学上有重要作用，因为其在表观遗传学基因调控上扮演重要角色，从而在控制细胞生命活动中HAT的活性在临床上被作为多种疾病的诊断标准，例如急性白血病、癌症、肿瘤、代谢综合征、神经系统疾病等。因此对HAT的活性检测在抗癌药物发现、基因转录的生化研究等临床诊断上有着重要意义。

对于HAT活性检测的方法，早期的检测方法主要依赖于放射自显影和放射性同位素，这些方法深受放射性物质的危害。故而需要发展一些非放射性的检测手段，HAT活性的检测主要依赖于抗体识别乙酰化位点、酶联免疫分析等，随着荧光的发展，荧光作为一个新颖的检测手段也应用于HAT活性检测上，然而荧光剂自身的光漂白、高背景值以及被测物中的一些自荧光现象都影响着HAT活性检测效率以及灵敏度，因此一种方法简便、无危害、高灵敏并且受限因素少的检测手段亟待被应用于HAT活性检测上。

电化学发光(ECL)是化学发光与电化学相结合的产物，是指通过施加一定的电压进行电化学反应，在电极表面产生一些电生的物质，然后这些电生物质之间或电生物质与体系中某些组分之间通过电子传递形成激发态，由激发态返回到基态而产生的一种发光现象。ECL由于背景信号低，有效避免了荧光法的缺点已经被用于多种传感器的设计上，其中AgNCs的ECL应用还比较少，在HAT活性检测上未出现相关报道。因此制备一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器为HAT活性检测提供了一种理想的选择。迄今为止，尚没有发现此类传感器在HAT活性应用上的专利与文章报道。

发明内容

针对上述背景技术，为了克服现有技术中乙酰转移酶活性检测方法的不足，本发明的第一个目的是提供一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器，该电化学发光传感器是通过以下方法构建得到的：

首先，将金电极进行抛光、清洗及活化处理，通过金硫键(Au-S)作用将捕获DNA(简称cDNA)组装于电极表面，并用巯基己醇(MCH)封闭电极表面非特异性结合位点；随后通过静电作用吸附多肽链，并在组蛋白乙酰转移酶(HAT p300)作用下对多肽链进行乙酰化处理，使之脱离金电极表面；其次金电极于含有两种发夹DNA(HP1&HP2)的杂交链溶液中进行杂交链反应，以及银簇(AgNCs)的还原；即可组装好的电化学发光(ECL)生物传感器。

为了尽可能发展一种组蛋白乙酰转移酶(HAT p300)的检测方法而提出的一种新型的方法简便、成本低，本发明的第二个目的是提供一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的方法，该方法为非疾病诊断方法，包括以下步骤：

将上述电化学发光(ECL)生物传感器作工作电极，Ag/AgCl作参比电极，铂丝作对电极，组成三电极体系于过硫酸钾(K₂S₂O₈)的PBS溶液中进行ECL测试；