[发明专利]一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器的构建

权利要求书

1.一种用于乙酰转移酶活性检测的电化学发光传感器，其特征是，该电化学发光传感器是通过以下方法构建得到的：

首先，将金电极进行抛光、清洗及活化处理，通过金硫键作用将捕获DNA组装于电极表面，并用巯基己醇封闭电极表面非特异性结合位点；随后通过静电作用吸附多肽链，并在组蛋白乙酰转移酶作用下对多肽链进行乙酰化处理，使之脱离金电极表面；最后将金电极置于含有两种发夹DNA的杂交链溶液中进行杂交链反应以及银簇的还原；即可组装好电化学发光传感器。

2.如权利要求1所述的电化学发光传感器，其特征是，金电极进行抛光、清洗及活化处理的具体方法是：金电极用铝粉抛光，用乙醇、水依次超声清洗后，于硫酸溶液中进行金电极表面的活化处理，水洗，吹干。

3.如权利要求2所述的电化学发光传感器，其特征是，金电极进行超声清洗时间为2.0～3.0 min。

4.如权利要求2所述的电化学发光传感器，其特征是，硫酸溶液浓度为0.5～1.0 M。

5.如权利要求2所述的电化学发光传感器，其特征是，吹干金电极使用氮气。

6.如权利要求1所述的电化学发光传感器，其特征是，将活化后的金电极浸入捕获DNA中，孵化，形成捕获DNA修饰的金电极，洗净、吹干后将捕获DNA修饰的金电极置于MCH溶液中封闭电极表面的非特异性结合位点，得到MCH-捕获DNA-Au电极。

7.如权利要求6所述的电化学发光传感器，其特征是，所述捕获DNA的浓度为1.0～10.0μM，孵化的温度范围为35.0～37.5 ℃，时间范围为1.0～3.0 h，吹干使用氮气。

8.如权利要求6所述的电化学发光传感器，其特征是，所述MCH溶液的浓度范围为1.0～2.0 mM，封闭时间范围为0.5～1.5h。

9.如权利要求1所述的电化学发光传感器，其特征是，将载有捕获DNA和非特异性结合位点封闭的金电极于肽链溶液中，室温下放置；随后将金电极浸泡在含有HAT p300的缓冲液中，恒温反应。

10.如权利要求9所述的电化学发光传感器，其特征是，室温下放置时间范围为20～50min。

11.如权利要求9所述的电化学发光传感器，其特征是，所用肽链浓度与捕获DNA浓度比为1:1，使用的HAT p300的浓度范围为0.1～1000.0 nM，Ac-CoA的浓度范围为8.0～10.0 μM。

12.如权利要求9所述的电化学发光传感器，其特征是，缓冲液为PBS溶液，pH=7.2～7.6。

13.如权利要求9所述的电化学发光传感器，其特征是，反应温度范围为30.0～37.0℃，反应时间范围为0.0～4.0 h。

14.如权利要求1所述的电化学发光传感器，其特征是，将乙酰化处理后的金电极取出洗净、吹干，浸入含有两种发夹DNA HP1和HP2的杂交缓冲液中，恒温进行杂交链反应；随后向杂交缓冲液中加入硝酸银溶液，暗中放置后，加入NaBH₄溶液，暗中进行反应还原形成银簇，得到组装完全的电化学发光传感器。

15.如权利要求14所述的电化学发光传感器，其特征，是所述的HP1与HP2的浓度比为1:1。

16.如权利要求14所述的电化学发光传感器，其特征是，HP1和HP2与cDNA的浓度比为1:1～3:1。

17.如权利要求14所述的电化学发光传感器，其特征是，缓冲液为PBS溶液，pH=7.2～7.6。