[发明专利]EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法及其应用

说明书

本发明提供了一种EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法及其应用，涉及医学检测的技术领域。本发明提供的EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法，通过分选EBV感染患者外周血的单核细胞，联合流式细胞技术及实时荧光定量PCR技术，可以准确定位EBV感染的细胞类型，有助于临床医生针对EBV感染的细胞类型制定治疗方案，对EBV感染造成的疾病进行高效、准确的治疗；另外，应用本发明提供的鉴定方法，可以确定EBV感染的靶细胞，能够指导相关治疗药物的制备，有针对性的制备靶向药物。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其是涉及一种EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法及其应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属于人类疱疹病毒第四型，于1964年由Epstein和Barr在研究非洲儿童恶性淋巴瘤时发现。EB病毒是一种嗜淋巴细胞病毒，是人类普遍感染的病毒之一，感染全球超过90％的人群。EB病毒因兼具较高感染率和致癌率，已于1997年被国际癌症研究中心定为I类致癌物。

目前，已存在一些EB病毒的检测试剂盒，但其检测的多是全血的EB病毒感染情况，不具有针对性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法，本发明的第二个目的在于提供EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法的应用，以缓解现有技术中存在的EB病毒检测针对性差的技术问题。

本发明提供了一种EB病毒感染淋巴细胞亚群的鉴定方法，所述鉴定方法包括以下步骤：

步骤(a)，提取人外周血单个核细胞；

步骤(b)，对所述人外周血单个核细胞进行分选，分别得到不同亚群分型的淋巴细胞；

步骤(c)，用流式细胞仪验证分选得到的所述不同亚群分型的淋巴细胞的纯度；

步骤(d)，分别提取所述不同亚群分型的淋巴细胞的DNA，并应用实时荧光定量PCR技术测定所述不同亚群分型的淋巴细胞中EB病毒DNA的含量。

进一步的，所述不同亚群分型的淋巴细胞包括：CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、CD19⁺B淋巴细胞以及CD56⁺NK细胞。

进一步的，步骤(b)中，所述分选包括基于磁珠的分选。

进一步的，步骤(b)中，所述分选包括基于流式细胞仪的分选。

进一步的，所述基于磁珠的分选包括：将所述外周血单个核细胞按照1:1:1:2:2的比例分为五份，分别加入能够与CD3⁺T淋巴细胞、能够与CD4⁺T淋巴细胞、能够与CD8⁺T淋巴细胞、能够与CD19⁺B淋巴细胞以及能够与CD56⁺NK细胞特异性结合的磁珠，然后分别利用磁力架进行分选。

进一步的，所述基于流式细胞仪的分选包括：在所述外周血单个核细胞中加入抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD8抗体、抗CD19抗体以及抗CD56抗体，孵育后过流式细胞仪进行分选。

进一步的，步骤(c)中，所述纯度合格的标准为90％以上。

另外，本发明还提供了鉴定方法在确定EB病毒感染疾病的治疗靶点中的应用。

另外，本发明还提供了鉴定方法在指导制备治疗EB病毒感染疾病的药物中的应用。