[发明专利]一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法在审
申请号: | 201710273256.3 | 申请日: | 2017-04-25 |
公开(公告)号: | CN107287188A | 公开(公告)日: | 2017-10-24 |
发明(设计)人: | 韦玉军;李航;王文娟;苏军;吴远航 | 申请(专利权)人: | 安徽安龙基因医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙)33240 | 代理人: | 王桂名 |
地址: | 230000 安徽省合肥市庐阳*** | 国省代码: | 安徽;34 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 改良 ctab 红景天 rna 方法 | ||
技术领域
本发明涉及植物RNA制备技术领域,具体来说是一种改良CTAB抽提红景天 RNA的方法。
背景技术
核酸是构成生命体中基本遗传物质的主要化合物,从核酸分子水平系统深入的研究是认识各种生命现象的基础。而高质量的RNA的获得对于功能基因组学以及遗传学研究具有重要意义。目前对动物、植物和微生物RNA提取的方法很多。其中有关植物RNA的抽提方法较多,但由于物种间的差异,RNA提取方法各有不同,现有的方法主要有硫氰酸胍-酚-氯仿抽提和纯化法、酚-SDS法、和 CTAB法等几种,其中CTAB法在多种动、植物中抽提RNA上具有广泛的应用,是一种有效、经济抽提RNA的方法。
高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor)别名:蔷薇红景天,扫罗玛布尔(藏名)等;又名库页红景天,是景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola rosea L.)植物,为多年生草本或亚灌木,常具肉质匍匐根状茎,是长白山珍稀药用植物之一。生长在海拔1800-2500
米高寒无污染地带,其生长环境恶劣,因而具有很强的生命力和特殊的适应性。红景天的主要成分有红景天苷、酪醇及配糖体,除此之外还有淀粉、蛋白质、脂肪、糖类、黄酮类化合物、氨基酸、无机元素、微量精油等。现代药理学研究结果表明红景天具有明显的抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗辐射、抗病毒、延缓机体衰老等功效,对于航天、深海、沙漠、高原、体育等行业是一种极具开发应用前景的环境适应药物,同时对高辐射从业人员、微机使用频繁人员、强脑力劳动者、中老年人群具有积极的滋补保健作用亦有很大的美容效果,可作护肤品,也可食用。
由于红景天生长环境的特殊,造就了红景天拥有独特的药理和保健作用。近年来有国内外对红景天及其制品的需求呈快速增长的趋势,但是一直以来基本上都是以野生红景天为资源在进行开发和利用,为避免红景天属植物生物资源的减少和生物遗传多样性的丧失,有关红景天生物大分子(例如DNA、RNA和蛋白质等)的分离纯化受到分子生物学技术领域科技人员的重视,但是目前针对景天科植物的RNA提取研究十分缺乏,研究出一种针对景天科植物的RNA提取已成为当前重要的课题之一。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中的无法高效提取红景天RNA的缺陷,提供一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法来解决上述问题。
本发明公开了一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法,具体步骤为:
(1)、取1-5g新鲜或者-80℃冷藏的红景天组织,加入液氮,研磨成粉,并迅速转移至预冷的2.0ml离心管中;
(2)、加入900ul CTAB提取液,混匀,65℃裂解10min,裂解时每管不多于0.2g,期间轻柔颠倒混匀2-3次;
(3)、将苯酚、氯仿和异戊醇混合在一起,得到苯酚、氯仿和异戊醇的混合液,向步骤(1)中制备得到的产品中加入等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液,涡旋振荡15~30sec,4℃下10,000g离心10min,取上清700ul移入新的 1.5ml离心管,再加入等体积的氯仿与异戊醇的混合液,涡旋振荡15~30sec,4℃下10,000g离心10min;
(4)、取上清1ml移入新的1.5ml离心管,加1/3体积8.0M Licl,颠倒混匀, -20℃过夜;
(5)、4℃下10,000g离心30min,弃去上清;
(6)、采用1ml 70%乙醇洗涤沉淀2-3次,4℃下10,000g离心10min,弃去上清,然后于室温放置5-10分钟使其晾干;
(7)、加入15ul的无核酸酶水溶解即可。
作为优选,所述的步骤(1)中,将红景天组织在研鉢中研磨成粉。
作为优选,所述的步骤(2)中,在加入CTAB提取液之前,先将CTAB提取液预热至65℃,并且加入质量浓度为5%的巯基乙醇。
作为优选,所述的步骤(2)中,所述的CTAB提取液有以下组分配置而成: 2%CTAB、2%PVP、100Mm Tris-HCl、25Mm EDTA、2M NaCl。
作为优选,所述的Tris-HCl的Ph为8.0,所述的EDTA的Ph为8.0。
作为优选,所述的步骤(3)中,所述的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液中,按照体积比,苯酚:氯仿:异戊醇为25:24:1,所述的氯仿与异戊醇的混合液,中,按照体积比,氯仿:异戊醇为24:1。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于安徽安龙基因医学检验所有限公司,未经安徽安龙基因医学检验所有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710273256.3/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。