[发明专利]一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法在审
| 申请号： | 201710273256.3 | 申请日： | 2017-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN107287188A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 韦玉军;李航;王文娟;苏军;吴远航 | 申请（专利权）人： | 安徽安龙基因医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙)33240 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市庐阳*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改良 ctab 红景天 rna 方法 | ||
1.一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：具体步骤为：
(1)、取1-5g新鲜或者-80℃冷藏的红景天组织，加入液氮，研磨成粉，并迅速转移至预冷的2.0ml离心管中；
(2)、加入900ul CTAB提取液，混匀，65℃裂解10min，裂解时每管不多于0.2g，期间轻柔颠倒混匀2-3次；
(3)、将苯酚、氯仿和异戊醇混合在一起，得到苯酚、氯仿和异戊醇的混合液，向步骤(1)中制备得到的产品中加入等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液，涡旋振荡15～30sec，4℃下10,000g离心10min，取上清700ul移入新的1.5ml离心管，再加入等体积的氯仿与异戊醇的混合液，涡旋振荡15～30sec，4℃下10,000g离心10min；
(4)、取上清1ml移入新的1.5ml离心管，加1/3体积8.0M Licl,颠倒混匀，-20℃过夜；
(5)、4℃下10,000g离心30min，弃去上清；
(6)、采用1ml 70％乙醇洗涤沉淀2-3次，4℃下10,000g离心10min，弃去上清，然后于室温放置5-10分钟使其晾干；
(7)、加入15ul的无核酸酶水溶解即可。
2.根据权利要求1所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中，将红景天组织在研鉢中研磨成粉。
3.根据权利要求1所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中，在加入CTAB提取液之前，先将CTAB提取液预热至65℃，并且加入质量浓度为5％的巯基乙醇。
4.根据权利要求1或3所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中，所述的CTAB提取液有以下组分配置而成：2％CTAB、2％PVP、100Mm Tris-HCl、25Mm EDTA、2M NaCl。
5.根据权利要求4所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的Tris-HCl的Ph为8.0，所述的EDTA的Ph为8.0。
6.根据权利要求1所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(3)中，所述的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液中，按照体积比，苯酚：氯仿：异戊醇为25:24:1，所述的氯仿与异戊醇的混合液，中，按照体积比，氯仿：异戊醇为24:1。
7.根据权利要求1所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(6)中，洗涤沉淀之前，需要先对乙醇进行预冷，所述的70％的乙醇是由7份的无水乙醇和3份的水混合而成，所述的水为用0.1％的DEPC处理并经高压灭菌的纯水。
8.根据权利要求1所述的一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，其特征在于：所述的步骤(9)中，在将无核酸酶水加入吸附膜中间部位时，需要先将无核酸酶水预热至65℃。
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