[发明专利]羊肚菌抗白霉病性能的鉴定方法

说明书

本发明公开了羊肚菌抗白霉病性能的鉴定方法，解决田间接种进行抗性鉴定方法中发病子实体相互传染，鉴定的准确性差和效率差的问题。主要包括以下步骤：(1)接种器皿准备；(2)接种病原菌准备；(3)羊肚菌子实体准备；(4)羊肚菌子实体处置；(5)白霉病病原菌接种；(6)接种后处置。本发明的优点：1.本发明具有操作简单，占用空间小，接种环境可控，简便快捷，抗性鉴定效率高等优点。2.本发明发病症状与田间一致，发病病斑单一，便于识别和统计，重现性好，与田间接种自然发病进行抗性鉴定相比，能有效避免发病子实体相互传染，从而提高鉴定的准确度。

技术领域

本发明与羊肚菌抗白霉病的鉴定方法有关。

背景技术

羊肚菌(Morchella)是一种名贵的食药两用真菌，含有丰富的人体必需氨基酸、多糖和萜类化合物，具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、保肝保肾等活性作用。随着羊肚菌栽培规模的扩大，病虫害成为限制羊肚菌产业发展的重要因素。白霉病是羊肚菌最常见的病害，是由Paecilomyces penicillatus引发，自2012年全国广泛商业栽培以来，白霉病发病率呈现逐渐增高的态势，因此，加强对羊肚菌白霉病的防控、加快对羊肚菌白霉病的抗病品种选育是推动羊肚菌产业发展的必然要求。

梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌是我国目前最广泛栽培的两个商业化品种，据调查统计，不同羊肚菌品种在白霉病抗性方面有一定的差异，因此，亟需挖掘一种科学规范的抗白霉病羊肚菌的鉴定方法，从而推动羊肚菌抗病品种的挖掘，以促进羊肚菌产业的发展。

作物病害防控和抗病性鉴定需要人工接种手段，田间活体接种需要较大的场地，工序复杂，且接种后条件不易控制。羊肚菌作为一种大田仿生栽培的大型真菌，外界环境因素（如温度、水分、土壤理化等）对白霉病的发生和发病表现有重要的影响。田间接种进行抗性鉴定方法中发病子实体相互传染，鉴定的准确性差，鉴定效。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单，准确性高，效率高的羊肚菌抗白霉病性能的鉴定方法。

本发明是这样实现的：

1、羊肚菌抗白霉病性能的鉴定方法，其特征在于步骤如下：

（1）接种器皿准备：将玻璃平皿、滤纸片、蒸馏水和镊子进行121℃，30min高压蒸汽灭菌，用细铁丝将无菌透气封口膜固定成下端开口的圆柱体模型，此圆柱体模型是为了避免在早期羊肚菌子实体受白霉病病原菌侵染，从而提高试验的准确性，灭菌备用，

(2) 接种病原菌的准备：接种白霉病病原菌Paecilomyces penicillatus收集于四川省农业科学院土壤肥料研究所，将白霉病病原菌活化转接到PDA培养基上，PDA培养基组成：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水1000ml，在28℃培养箱中培养5d，将菌落作为接种材料，

(3) 羊肚菌子实体准备：将步骤(1)中若干无菌封口膜模型盖在刚形成的至少两种羊肚菌子实体上，两天后，带上无菌手套，采集的健康的至少两品种羊肚菌：揭开无菌封口膜模型，将每种羊肚菌子实体连土部分拔起，用干净的毛刷去除菌柄底部的土壤，将采集的每种羊肚菌子实体用干净的器皿带回室内备用，

(4) 白霉病病原菌接种：将步骤(1)处理后的灭菌滤纸片置于培养皿底部，随后倒入适量的灭菌蒸馏水，待滤纸片浸湿后，将多余的水分倒出，用无菌镊子将步骤(3)中处理好的每种羊肚菌子实体分别夹入不同的培养皿，用无菌镊子取1 mm²步骤(2)处理后的病原菌菌落接种于羊肚菌子实体菌盖中部，盖好培养皿盖，以接种1 mm²无菌PDA培养基做对照，对照的意义是为了证明白霉病病斑是由接种发病引起，而不是自然发病引起，试验才具有科学性。