[发明专利]一种硬质秸秆发酵菌剂的配制方法

说明书

技术领域

本发明与微生物有关，具体而言，与发酵菌剂有关，进一步来说，涉及秸秆的发酵菌剂。

技术背景

作物秸秆的有机质含量高，富含农作物生长所需的营养元素，几乎不含杂质.是有机肥较佳的原料，由其生产的产品具有较高的农用价值。然而，秸秆类的含碳量较高、C/N比值高，并不适合单独作为有机肥的原材料，而需要与含碳量较低、C/N比值低的粪便类配合使用。一般软质作物秸秆的木质素、纤维素、半纤维素含量相对较低，较易腐熟，如水稻、小麦、油菜、玉米等。而硬质秸秆，如谷壳、木屑和树皮的木质素、纤维素、半纤维素含量较高、C/N在100 以上，不易分解，降解时间长，能较长期保持原有的形态。但黄豆、棉花、烟草等的杆，一般作为水分含量高、C/N比值低的污泥、畜禽粪尿的辅料，需要控制用量，物料粒径要小，颗粒越细，才能加快降解速度。

对于不同种类的秸秆，要使其加快降解变为肥料，传统的方法就是通过将秸秆发酵。有机肥发酵过程会发生两个主要变化，一个是把复杂的有机物质(纤维素、半纤维素、蛋白质等)分解为简单的无机化合物，这是养分有效化的过程，称之为矿质化过程；另一个是有机物矿质化过程中形成的中间产物，再合成为比原来更为复杂的腐殖质，称之为腐殖化过程。众所周知，发酵是一个微生物的生化过程，需要使用细菌。不同硬度的秸秆，使用的菌种也不一样。

经检索，中国专利数据库中涉及发酵菌或菌剂的专利申请件不很多，检索到的有ZL2006101461458号《栓菌AH28－2固态发酵生产漆酶的方法》、2011104132326号《一种大肠埃希氏菌RB3菌株及用它液态发酵制备乙酰酯酶的方法》、2014100753519号《一种西瓜用防病高产EM菌剂发酵复合肥料》、2014100752658号《一种西瓜种植用EM菌剂发酵复合肥料》、2015103288138号《一种鸽粪EM菌发酵法》等，这些发酵菌剂并不能用于秸秆的发酵。适用于秸秆发酵的专利申请件有2011102578402号《一种秸秆发酵复合菌剂及其应用》，系由枯草芽孢杆菌、黄绿木霉、酿酒酵母、米曲霉、扩张青霉、绿色木霉复合而成。目前尚无用于硬质秸秆发酵菌剂的专利申请件。

发明内容

本发明旨在提供一种硬质秸秆发酵菌剂的配制方法，用以提高硬质秸秆的发酵速度，从而用于制造有机肥料，为农业生产服务。

发明人提供的用于硬质秸秆发酵菌剂的配制方法包括以下步骤：

第一步，选定菌种：以真菌白腐菌和细菌枯草芽孢杆菌作为配制用于硬质秸秆发酵菌剂的原料菌种；所述真菌白腐菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，真菌白腐菌对纤维素降解能力较强；所述细菌枯草芽孢杆菌自行筛选和培养的。

对于选用的原料菌种，都需要通过常规的手段，测定其对烟草主要病原菌拮抗作用，鉴定选用的活性菌株分子；确定其用于配制混合菌剂的可行性。

第二步，菌种的培养：

(1)真菌白腐菌的培养

①真菌白腐菌母种的培养

事先将玉米粒浸泡72h后装袋，并于121℃下高压蒸汽灭菌 30-40min后冷却备用；接着将活化后的白腐菌接种于玉米粒培养基，置恒温培养箱内28℃培养，等到菌丝长满整个玉米粒之后备用；

②真菌白腐菌的扩大培养

将培养好的白腐菌母种接入到麦麸棉籽壳混合培养基中，置恒温培养箱内28℃培养，待培养基表面长满菌丝后，每48h翻抛1次，直到白腐菌布满整个麦麸棉籽壳培养基。

(2)细菌枯草芽孢杆菌培养

①枯草芽孢杆菌种子液的制备：将保存的枯草芽孢杆菌菌株在 NA固体培养基、平板上于37℃培养箱中培养16h，然后挑取单菌落于种子培养基中，37℃，170r·min^-1条件下培养16h作为种子液。

②枯草芽孢杆菌的固体发酵：将麦麸与按照质量配比3∶1组成的棉籽壳混合物在121℃、30min间隔灭菌两次，得到麦麸棉籽壳混合培养基；然后将枯草芽孢杆菌种子液按10％的接种量接入到麦麸棉籽壳混合培养基中，麦麸棉籽壳混合培养基的添加量为20％，含水量为60％，发酵温度为28℃，翻抛次数为1次/24h；实现枯草芽孢杆菌的固体发酵。

第三步白腐菌、枯草芽孢杆菌混合菌剂的配制