[发明专利]一种人类HLA‑B*5801基因多态性检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术以及医学领域，具体而言，涉及一种人类HLA-B*5801基因检测试剂盒。

背景技术

别嘌呤醇是治疗痛风的一线药物，是目前唯一的黄嘌呤氧化酶抑制剂，主要用于治疗痛风和防止痛风性肾病、继发性高尿酸血症以及重症癫痫的辅助治疗。其代谢产物氧嘌呤醇通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性(后者能使次黄嘌呤转为黄嘌呤，再使黄嘌呤转变成尿酸)，使尿酸生成减少，血中及尿中的尿酸含量降低到溶解度以下的水平，从而防止尿酸结石的沉积，有助于痛风结节及尿酸结晶的重新溶解。但别嘌呤醇可引起严重的副作用，包括Stevens-John综合征(SJS)及中毒性表皮坏死症(TEN)。

科学研究发现HLA-B*5801等位基因与别嘌呤醇引起的严重皮肤不良反应(SCARs)有很强的关联性，而在中国人群中携带此等位基因的频率较高，因此2012年美国风湿管理学会更新了痛风管理指南，其中建议使用别嘌呤醇前，对严重过敏反应的高危人群(中国裔汉族，韩国裔，泰国裔)，应该进行HLA-B*5801等位基因检测。

HLA(人类白细胞抗原)可分为三类，其中编码I类分子中的HLA-B系列抗原的HLA-B基因有上千种等位基因，HLA-B*5801等位基因是其中的一种。

日本学者研究发现PSORS1C1基因位点的SNP-rs9263726与别嘌呤醇所致的SJS/TEN相关，且该SNP与HLA-B*5801完全连锁，这一发现为检测HLA-B*5801等位基因找到了简单快速的方法。

目前针对基因多态性的检测方法很多，如直接测序法，焦磷酸测序法，高分辨率溶解曲线检测法(High Resolution Melting Analysis，HRM)，荧光定量PCR法等。其中最常见方法为测序法，该方法费用较低，但操作耗时长且灵敏度低；高分辨率溶解曲线法对设备要求比较特殊，在临床推广存在一定的困难；传统荧光定量PCR法在临床上应用较为广泛，但该方法检测基因多态性一般采用Genotyping方法进行检测，该方法对样本类型、样本质量以及多态性分布有一定要求，全血样本和低浓度基因组DNA均不能进行准确检测。因此，需要建立一种快速有效的可以直接检测全血，同时兼容检测低浓度基因组DNA的检测方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HLA-B*5801基因多态性的检测试剂盒，以此解决现有基因多态性检测技术中全血样本无法直接进行检测，以及低浓度基因组DNA检测效果不理想的问题。本试剂盒可用于高通量、低成本快速检测HLA-B*5801基因多态性，其灵敏度高，特异性强，可适用于EDTA、柠檬酸盐抗凝新鲜全血或血浆直接进行检测，也可以适用于从EDTA、柠檬酸盐抗凝新鲜全血或血浆中提取的人类基因组DNA的检测。为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种人类HLA-B*5801基因多态性检测试剂盒，包括：

核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的正向外引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的反向外引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的用于检测目的基因的突变位点的ARMS引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的用于检测野生型位点的Taqman探针；

核苷酸序列为SEQ ID NO:5所示的用于检测突变位点的Taqman探针。

其中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2为普通PCR引物，扩增包含HLA-B*5801基因多态性的DNA片段；SEQ ID NO:3为ARMS引物，用于特异性扩增含有HLA-B*5801密码子CAT的DNA片段。ARMS引物3’末端与突变型碱基配对，SEQ ID NO:3在ARMS引物的3’末端倒数第3位增加错配碱基。

本发明提供的试剂盒用于检测HLA-B*5801等位基因的序列号为rs9263726的SNP位点：

表1：HLA-B*5801等位基因的类型

其中，rs9263726G为野生型位点，rs9263726A为突变型位点。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1).灵敏度高，可以准确检测0.2ng基因组DNA的基因型；

2).特异性好，采用ARMS特异性引物和SNP分型探针相结合的技术，可以特异性扩增识别对应的基因型；