[发明专利]一种人类HLA‑B*5801基因多态性检测试剂盒

权利要求书

1.一种人类HLA-B*5801基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包括：

核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的正向外引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的反向外引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的用于检测目的基因的突变位点的ARMS引物；

核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的用于检测野生型位点的Taqman探针；

核苷酸序列为SEQ ID NO:5所示的用于检测突变位点的Taqman探针。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Taqman探针5’端连接有荧光报告基团，在核酸的3’端连接有荧光淬灭基团，且两个Taqman探针的荧光报告基团不同；

所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、CY3和CY5中的任一种；所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2和NFQ中的任一种。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述Taqman探针上连接有MGB修饰基团；

优选地，所述MGB修饰基团与所述荧光淬灭基团连接。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内标引物和内标探针；

优选地，所述内标引物和内标探针为人源性内标；

更优选地，所述内标引物为核苷酸序列为SEQ ID NO:6所示的正向内标引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:7所示的反向内标引物；所述内标探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:8所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述内标探针5’端连接有荧光报告基团，在核酸的3’端连接有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、CY3和CY5中的任一种；所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2和NFQ中的任一种；且所述内标探针与所述Taqman探针上的荧光报告基团均不同。

6.根据权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括弱阳性对照液和/或空白对照液；

所述弱阳性对照液为含有2种质粒的混合液，所述2种质粒分别含有2种不同的带有待检测突变位点的HLA-B*5801等位基因；优选地，所述质粒的浓度为2000～3000copies/μl；

所述空白对照液为Tris-HCl缓冲液；优选地，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为7～13mM，pH为7.5～8.5。

7.根据权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括血液处理剂、PCR缓冲液、酶和水中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述血液处理剂为0.9％的NaCl水溶液。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液中包括PCR添加剂、MgCl₂和dNTPs中的一种或多种；

优选地，所述PCR添加剂包括DMSO、甘油、BSA中的一种或多种；

优选地，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dUTP。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述酶包括Taq酶、UNG酶；

优选地，所述Taq酶和UNG酶单独分装或混合制成溶液；

更优选地，当所述Taq酶和UNG酶混合制成溶液时，所述Taq酶和UNG酶的总量比为：(0.5U～1.0U)：(0.1U～0.5U)。