[发明专利]ATG16L1基因在增强新城疫病毒的复制能力中的用途

说明书

本发明公开了一种自噬相关基因ATG16L1增强新城疫病毒复制的方法和应用，属于基因表达生物技术领域。本发明所述高效复制新城疫病毒载体为将自噬相关基因ATG16L1构建到真核表达载体pEGFP‑N1中，获得重组鸡ATG16L1的真核表达载体pEGFP‑N1‑gaATG16L1质粒。本发明成功构建重组鸡ATG16L1的真核表达质粒，不仅可以保证在显微镜下能清晰明确看到转染效果，而且ATG16L1能够加强新城疫病毒在细胞上的繁殖效率。实现了新城疫病毒的高效复制。

技术领域

本发明涉及ATG16L1基因在增强新城疫病毒的复制能力中的用途。

背景技术

早在1962年Ashford和Porten在电子显微镜下就发现肝细胞中加入高血糖素后会出现自噬现象。自噬的发生受到自噬相关基因的调控。ATG编码的蛋白在自噬过程中帮助自噬体的生成，延伸和再循环。ATG最早在酵母中被发现，陆续的在哺乳动物中也发现了同源的自噬基因。这些自噬基因在在不同物种中都有很好的保守性，几乎任何一种自噬基因的缺失或者突变都可能导致阻断自噬的发生。自噬相关基因ATG16L1编码的蛋白是自噬过程中所必需的。该基因位于2q37.1，编码的蛋白包括卷曲螺旋蛋白和色氨酸-天冬氨酸重复序列，表达的主要位置在CD4+、CD8+、CD19+淋巴细胞、巨噬细胞、肠上皮细胞等。ATG16L1是细胞内细菌引起自噬主要的代谢蛋白，其与ATG5和ATG12形成复合物处理细菌的感染。比如它能抑制巨噬细胞中结核分枝杆菌。如若ATG16L1发生变异，突变型的基因表达的蛋白可能影响正常免疫功能而导致疾病的发生。哺乳动物中，ATG16L1是LC3正确定位多必须的。ATG16L1基因的缺失会导致ATG5-ATG12复合物无法结合和定位到细胞膜，进而影响LC3与PE的结合，导致自噬小体不能形成，p62蛋白大量堆积，自噬过程发生障碍，宿主清除病原体能力下降。因此认为ATG16L1具有调节自噬的功能，与LC3和p62关系密切。ATG16L1与某些病毒粒子共定位发现它可能对病毒的复制有重要的影响。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足。为研发高效复制新城疫病毒的技术，本发明提供了一种增强新城疫病毒复制能力的表达载体的构建方法，本发明提供了该构建方法得到的表达载体及其用途，本发明还提供了一种繁殖新城疫病毒的细胞，本发明还提供了一种增强新城疫病毒复制能力的方法，本发明还提供了ATG16L1基因的用途。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种增强新城疫病毒复制能力的表达载体的构建方法，所述方法是将ATG16L1基因构建到基础载体上，获得表达ATG16L1基因的表达载体。

优选地，所述基础载体是真核表达载体。

优选地，所述基础载体是带有GFP荧光标签的pEGFP-N1载体。本发明通过将ATG16L1基因连接到带有GFP荧光标签的pEGFP-N1载体上，与普通的繁毒方式相比能大大提高病毒的表达量，也能通过荧光标签及时观察细胞状态，提高病毒繁殖的成功率。

本发明提供了一种采用上述所述的构建方法得到的表达载体。

本发明提供了一种繁殖新城疫病毒的细胞，所述细胞转染有如权利要求4所述的表达载体。

本发明提供了一种增强新城疫病毒复制能力的方法，所述方法是将上述所述的表达载体转染至生产新城疫病毒的细胞中。本发明提供了一种利用自噬相关基因ATG16L1基因来增强新城疫病毒复制的方法，优选地，本发明所述的ATG16L1基因连接于真核表达载体pEGFP-N1载体上，易于生产，成本低，病毒数量增加效率高，提供稳定复制新城疫病毒的途径。

本发明提供了ATG16L1基因在增强新城疫病毒的复制能力中的用途。

本发明提供了ATG16L1基因在制备增强新城疫病毒复制能力的表达载体中的用途。

本发明提供了上述所述的表达载体在增强新城疫病毒的复制能力中的用途。