[发明专利]拮抗抑制人PD-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种拮抗抑制人PD‑1抗原与其配体结合的单克隆抗体或其衍生体，其包含抗体轻链可变区的抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4及SEQ ID NO：5的氨基酸序列；抗体重链可变区的抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9及SEQ ID NO：10的氨基酸序列。本发明还公开了该抗体的人源化制备过程及该人源化抗体重链可变区与轻链可变区氨基酸序列。该抗体或其衍生体可作为药物组合物成分或制备成合适药物制剂，单独给药或与化疗药物等其他治疗手段合并使用，用于治疗如结肠癌等实体瘤。

技术领域

本发明属于生物技术-单克隆抗体领域。本发明涉及一种拮抗抑制程序性死亡受体PD-1(programmed death-1)与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与其制备方法和用途。

背景技术

长期以来，生物医学界一直认为肿瘤的发生发展与机体内的免疫功能状态息息相关。体内免疫系统在正常状态下发挥着监控(Immune surveillance)变异的肿瘤细胞增长及抑制肿瘤转移复发的功能。免疫系统如出现功能抑制或低下时，肿瘤增长或转移复发则会加快，严重时更危及生命。因此以通过调动机体自身免疫功能来直接攻击或杀灭肿瘤为目的的“肿瘤免疫疗法(Tumor Immunotherapy)”是肿瘤临床治疗领域追求的一大目标。自2011年以来，免疫疗法在肿瘤临床治疗领域取得了一系列具革命性变化(revolutionizingcancer treatment)的重大突破(见综述：Topalian SL等:Cancer immunotherapy comesof age.JCO 2011；29:4828-4836；Pardoll D和Drake C：Immunotherapy earns its spotin the ranks of cancer therapy.J Exp Med 2012；209：201-209；Page DB,Postow MA,Callahan MK,Allison JP and Wolchok JD：Immune modulation in cancer withantibodies.Annu Rev Med 2014；65:185–202)。这些革命性突破则主要得益于免疫学基础研究领域的进展及以杂交瘤/基因工程抗体等为代表的现代生物技术的出现与发展。

免疫学基础研究表明由胸腺发育而来的T淋巴细胞介导的细胞免疫在识别监控及/或直接攻击消灭肿瘤细胞的过程中起着非常致为关键的作用。T淋巴细胞在功能上大致可分为两大类：即以调控免疫功能为主的辅助T细胞(T helper cells)和直接参与识别靶抗原与攻击杀伤靶细胞的细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells，CTL)。

辅助T细胞或细胞毒性T细胞(CTL)的活化、增生及其在清除靶抗原与攻击杀伤靶细胞等免疫功效阶段一般都需要两个信号通路的协同作用：协同信号通路1是通过T细胞上的特异识别不同抗原的受体蛋白(T-cell receptor，TcR)与表达在肿瘤靶细胞或抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APC)上相应的特异抗原多肽(antigen peptide)-MHC(major histocompatibility)的结合而传导，该信号通路为抗原特异性的；协同信号通路2则是通过T细胞上的协同刺激因子(co-stimulatory molecules)或协同抑制因子(co-inhibitory molecules)与其相应表达在靶细胞或抗原提呈细胞(Antigen presentingcells，APC)上的配体结合而传导，该信号通路为抗原非特异性的。T淋巴细胞一般只有在协同信号通路1与协同信号通路2都同时存在的状态下才发生活化增生与清除靶抗原及杀灭靶细胞的作用。

正向上调免疫功能的协同刺激因子主要包括CD28与其配体B7-1(CD80)、B7-2(CD86)；CD40与其配体CD40L；CD137(又称为4-1BB)与其配体CD137-L；CD278(ICOS，Inducible T-cell costimulator)与其配体ICOS-L等。