[发明专利]大黄鱼白细胞介素17C2基因大肠杆菌表达产物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及白细胞介素17，尤其是涉及大黄鱼白细胞介素17C2基因大肠杆菌表达产物及其制备方法与应用。

背景技术

白细胞介素17(Interleukin-17，IL-17)属于一类新的细胞因子家族，能够诱导促炎因子(如IL-6、G-CSF、TNF-α)、趋化因子(如CXCL1、CXCL2、CCL20等)，以及炎症效应因子(急性期蛋白、补体)等多种基因表达，在抗胞外细菌感染，炎症反应及自身免疫性疾病的发生和发展中发挥关键作用。IL-17对炎症反应过程中白细胞迁移也具有重要的协调作用(Iwakura,Y.,Ishigame,H.,Saijo,S.,Nakae,S.,2011,Functional Specialization of Interleukin-17Family Members[J].Immunity 34,149-162)。IL-17家族现已发现6个成员，包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F，各个成员之间的序列相似性并不高，但是具有类似的蛋白结构，都含有四个保守的半胱氨酸残基以维系其三维构型(Gu,C.,Wu,L.,Li,X.,2013.IL-17family:cytokines,receptors and signaling[J].Cytokine 64,477-485)。作为IL-17家族的一员，IL-17C主要参与宿主的黏膜免疫，可以诱导上皮细胞炎症反应，刺激促炎细胞因子，趋化因子及抗菌肽的表达(Song,X.,Zhu,S.,Shi,P.,Liu,Y.,Shi,Y.,Levin,S.D.,Qian,Y.,2011.IL-17RE is the functional receptor for IL-17C and mediates mucosal immunity to infection with intestinal pathogens[J].Nat.Immunol.12,1151-1158)。此外，IL-17C可诱导TNF-α和IL-1β在单核细胞系THP-1中表达，并促进诱导嗜中性粒细胞迁移(Iwakura,Y.,Ishigame,H.,Saijo,S.,Nakae,S.,2011,Functional Specialization of Interleukin-17Family Members[J].Immunity 34,149-162)。与哺乳动物不同，鱼类具有2个IL-17C的同源基因：IL-17C1和IL-17C2，二者序列相似性较高。鱼类IL-17C主要表达在黏膜相关组织中，在LPS诱导或细菌感染后表达量显著升高，表明IL-17C参与鱼类的抗细菌免疫反应(Kono,T.,Korenaga,H.,Sakai,M.,2011.Genomics of fish IL-17ligand and receptors:a review[J].Fish Shellfish Immunol.31,635-643.)。目前，在鱼类中还未展开对IL-17C功能的相关研究。

发明内容

本发明的目的之一在于提供大肠杆菌BL21/pET-32a-LCIL-17C2(Escherichia coli BL21/pET-32a-LCIL-17C2)。

本发明的目的之二在于提供一种大黄鱼白细胞介素17C2基因大肠杆菌表达产物及其制备方法。

本发明的目的之三在于提供大黄鱼IL-17C2重组蛋白的应用。

所述大肠杆菌BL21/pET-32a-LCIL-17C2(Escherichia coli BL21/pET-32a-LCIL-17C2)已于2016年12月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2016782，中国典型培养物保藏中心的地址为中国，武汉，武汉大学。

所述大黄鱼白细胞介素17C2基因大肠杆菌表达产物，为分子量约34kDa的大黄鱼IL-17C2重组蛋白。

所述大黄鱼白细胞介素17C2基因大肠杆菌表达产物的制备方法包括以下步骤：

1)克隆大黄鱼IL-17C2基因全长cDNA序列，再采用PCR技术扩增出编码第25～171位氨基酸的大黄鱼IL-17C2成熟肽基因片段；

2)将步骤1)得到的大黄鱼IL-17C2成熟肽基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-32a，得到含大黄鱼IL-17C2成熟肽基因片段的重组表达载体pET-32a-LCIL-17C2；