[发明专利]核酸快速提取试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及基于磁珠法从全血、培养细胞、组织、唾液、G-细菌、G+细菌等常见临床样本中提取基因组DNA的核酸快速提取试剂盒及其提取方法。

背景技术

核酸的分离与纯化技术是分子生物学实验的一项基本技术，从最初的目的基因提取到PCR产物纯化或“胶回收”、以及基因克隆中质粒的提取等实验过程，都离不开核酸提取纯化。核酸分离纯化技术起源于20世纪50年代，在70年代和80年代中传统的核酸沉淀溶解分离纯化方法得到了普遍的应用和推广。常规的核酸提取方法涉及细胞裂解、有机溶剂萃取、沉淀和离心等步骤。这个过程费时费力，不易自动化，且随着生物和医学技术的快速发展，原有的手工纯化核酸的方法，已经很难满足大规模、高通量的实验要求。

发明内容

本发明针对现有技术核酸提取难以满足大规模、高通量的实验要求的问题，提高一种基于磁性分离技术的简便快速的磁性分离试剂盒。

具体方案为：核酸快速提取试剂盒，所述试剂盒内包括单独配制的混合酶工作液、裂解吸附液、洗涤液、漂洗液和洗脱液，所述混合酶工作液包括蛋白酶K和溶菌酶，所述裂解吸附液包括Gu-Hcl、Tris-Hcl、EDTA、异丙醇、SDS、Triton-100、β-巯基乙醇和柠檬酸钠，所述洗涤液包括Licl、Nacl、MOPS和乙醇，所述漂洗液为乙醇，所述洗脱液为EDTA和Tris-Hcl。

其中，Gu-Hcl为盐酸胍，Tris-Hcl的别名为三(羟甲基)氨基甲烷、氨丁三醇、缓血酸铵或者三羟甲基氨基甲烷，分子式为C₄H₁₁NO₃；EDTA为乙二胺四乙酸，分子式为C₁₀H₁₆N₂O₈；SDS为十二烷基硫酸钠；Triton-100为的别名为聚乙二醇辛基苯基醚或者聚氧乙烯辛基苯基醚，Licl为氯化锂，MOPS为3-(N-吗啉)丙磺酸。

进一步的，所述混合酶工作液中，蛋白酶K的浓度为10~40mg/mL，溶菌酶的浓度为10~40mg/mL。

进一步的，所述裂解吸附液中，Gu-Hcl的浓度为3~8mol/L，Tris-Hcl的浓度为10~30mmol/L，EDTA的浓度为1~10mmol/L、异丙醇的体积比为1/2~1/6，SDS为0.1~0.5%，Triton-100为0.5~2%，β-巯基乙醇为0.5~2%，Nacl的浓度为800mmol/L，柠檬酸钠的浓度为200mmol/L，其中柠檬酸钠的pH=6.8。

进一步的，所述洗涤液中，Licl的浓度为800mmol/L，Nacl的浓度为100mmol/L，MOPS的浓度为50mmol/L，乙醇的体积比为60%，其中乙醇的pH=7.0。

进一步的，所述漂洗液中，乙醇的浓度为70%。

进一步的，所述洗脱液中，EDTA的浓度为0.5mmol/L，Tris-Hcl的浓度10mmol/L，其中Tris-Hcl的pH=8.0。

核酸快速提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：步骤一、用试管取100μL样本，加入10μL混合酶工作液，56℃水浴5min；

步骤二、加入750μL裂解吸附液和磁性纳米微球，上下颠倒试管5-10次充分混合，在室温下放置3min；

步骤三、用磁分离架分离磁珠弃上清；

步骤四、用800μL洗涤液洗2次，分离磁珠弃上清；

步骤五、用1000μL漂洗液漂洗2次后分离磁珠弃上清；

步骤六、室温放置3min，挥干乙醇，加入100μL洗脱液上下吹打沉淀，使微球充分悬浮，在室温下放置3min，得纯化的DNA。

所述的样本为全血、培养细胞、组织、唾液、G-细菌和G+细菌。

磁珠法核酸运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠，该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合，利用氧化硅纳米微球的超顺磁性，在Chaotropic盐（盐酸胍、异硫氰酸胍等）和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的DNA和RNA分离出来，可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。