[发明专利]核酸快速提取试剂盒及其使用方法在审
| 申请号: | 201710258358.8 | 申请日: | 2017-04-19 |
| 公开(公告)号: | CN106906207A | 公开(公告)日: | 2017-06-30 |
| 发明(设计)人: | 孙智勇;许朋 | 申请(专利权)人: | 遵义医学院 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
| 代理公司: | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙)50217 | 代理人: | 黄书凯 |
| 地址: | 563000 贵*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 核酸 快速 提取 试剂盒 及其 使用方法 | ||
1.核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述试剂盒内包括单独配制的混合酶工作液、裂解吸附液、洗涤液、漂洗液和洗脱液,所述混合酶工作液包括蛋白酶K和溶菌酶,所述裂解吸附液包括Gu-Hcl、Tris-Hcl、EDTA、异丙醇、SDS、Triton-100、β-巯基乙醇和柠檬酸钠,所述洗涤液包括Licl、Nacl、MOPS和乙醇,所述漂洗液为乙醇,所述洗脱液为EDTA和Tris-Hcl。
2.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述混合酶工作液中,蛋白酶K的浓度为10~40mg/mL,溶菌酶的浓度为10~40mg/mL。
3.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述裂解吸附液中,Gu-Hcl的浓度为3~8mol/L,Tris-Hcl的浓度为10~30mmol/L,EDTA的浓度为1~10mmol/L、异丙醇的体积比为1/2~1/6,SDS为0.1~0.5%,Triton-100为0.5~2%,β-巯基乙醇为0.5~2%,Nacl的浓度为800mmol/L,柠檬酸钠的浓度为200mmol/L,其中柠檬酸钠的pH=6.8。
4.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述洗涤液中,Licl的浓度为800mmol/L,Nacl的浓度为100mmol/L,MOPS的浓度为50mmol/L,乙醇的体积比为60%,其中乙醇的pH=7.0。
5.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述漂洗液中,乙醇的浓度为70%。
6.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述洗脱液中,EDTA的浓度为0.5mmol/L,Tris-Hcl的浓度10mmol/L,其中Tris-Hcl的pH=8.0。
7.根据权利要求1~6任一所述的核酸快速提取试剂盒的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、用试管取100μL样本,加入10μL混合酶工作液,56℃水浴5min;
步骤二、加入750μL裂解吸附液和磁性纳米微球,上下颠倒试管5~10次充分混合,在室温下放置3min;
步骤三、用磁分离架分离磁珠弃上清;
步骤四、用800μL洗涤液洗2次,分离磁珠弃上清;
步骤五、用1000μL漂洗液漂洗2次后分离磁珠弃上清;
步骤六、室温放置3min,挥干乙醇,加入100μL洗脱液上下吹打沉淀,使微球充分悬浮,在室温下放置3min,得纯化的DNA。
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