[发明专利]核酸快速提取试剂盒及其使用方法在审

专利信息
申请号: 201710258358.8 申请日: 2017-04-19
公开(公告)号: CN106906207A 公开(公告)日: 2017-06-30
发明(设计)人: 孙智勇;许朋 申请(专利权)人: 遵义医学院
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10
代理公司: 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙)50217 代理人: 黄书凯
地址: 563000 贵*** 国省代码: 贵州;52
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摘要:
搜索关键词: 核酸 快速 提取 试剂盒 及其 使用方法
【权利要求书】:

1.核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述试剂盒内包括单独配制的混合酶工作液、裂解吸附液、洗涤液、漂洗液和洗脱液,所述混合酶工作液包括蛋白酶K和溶菌酶,所述裂解吸附液包括Gu-Hcl、Tris-Hcl、EDTA、异丙醇、SDS、Triton-100、β-巯基乙醇和柠檬酸钠,所述洗涤液包括Licl、Nacl、MOPS和乙醇,所述漂洗液为乙醇,所述洗脱液为EDTA和Tris-Hcl。

2.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述混合酶工作液中,蛋白酶K的浓度为10~40mg/mL,溶菌酶的浓度为10~40mg/mL。

3.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述裂解吸附液中,Gu-Hcl的浓度为3~8mol/L,Tris-Hcl的浓度为10~30mmol/L,EDTA的浓度为1~10mmol/L、异丙醇的体积比为1/2~1/6,SDS为0.1~0.5%,Triton-100为0.5~2%,β-巯基乙醇为0.5~2%,Nacl的浓度为800mmol/L,柠檬酸钠的浓度为200mmol/L,其中柠檬酸钠的pH=6.8。

4.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述洗涤液中,Licl的浓度为800mmol/L,Nacl的浓度为100mmol/L,MOPS的浓度为50mmol/L,乙醇的体积比为60%,其中乙醇的pH=7.0。

5.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述漂洗液中,乙醇的浓度为70%。

6.根据权利要求1所述的核酸快速提取试剂盒,其特征在于,所述洗脱液中,EDTA的浓度为0.5mmol/L,Tris-Hcl的浓度10mmol/L,其中Tris-Hcl的pH=8.0。

7.根据权利要求1~6任一所述的核酸快速提取试剂盒的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、用试管取100μL样本,加入10μL混合酶工作液,56℃水浴5min;

步骤二、加入750μL裂解吸附液和磁性纳米微球,上下颠倒试管5~10次充分混合,在室温下放置3min;

步骤三、用磁分离架分离磁珠弃上清;

步骤四、用800μL洗涤液洗2次,分离磁珠弃上清;

步骤五、用1000μL漂洗液漂洗2次后分离磁珠弃上清;

步骤六、室温放置3min,挥干乙醇,加入100μL洗脱液上下吹打沉淀,使微球充分悬浮,在室温下放置3min,得纯化的DNA。

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