[发明专利]一种检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器

说明书

本发明提供了一种检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器，其制备为在电极上依次修饰有iDNA层、Helper层和均相反应混合液。本发明利用了核酸适配体的特异性识别，利用鼠伤寒沙门氏菌的aptamer作为识别物质实现了对目标物鼠伤寒沙门氏菌的高特异性检测；利用核酸工具酶，实现了目标物的循环利用，起到了信号放大的作用。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及一种检测鼠伤寒沙门氏菌的电化学生物传感器。

背景技术

沙门氏菌为两端钝圆的革兰氏阴性菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，其他都有周身鞭毛。沙门氏菌是一种常见的人畜共患病原体，不仅能够引起胃肠炎，还会引起败血症、伤寒及肠外灶性感染等多种症候群。尤其以鼠伤寒沙门氏菌为代表的病原菌在食品安全、环境监测、疾病预防等方面造成了巨大的威胁，对人体健康造成了很大危害，因而受到人们的强烈关注。近年来，鼠伤寒沙门氏菌检测技术有了很大的进展，由十分困难的传统分离培养法到免疫学检测方法发展成为今天的分子生物学检测技术。毫无疑问，检测方法的进展在便利鼠伤寒沙门氏菌检测的同时，也将更好地为了解鼠伤寒沙门氏菌奠定了基础。但是也存在着仪器操作复杂，检测耗时长，灵敏度不高的技术问题。

发明内容

本发明针对现有检测方法中仪器操作复杂、耗时长和需要专业操作人员的缺点，提供了一种特异性强、灵敏度高、成本低和检测速度快的基于核酸外切酶Ⅲ辅助的层叠信号放大的电化学生物传感器用于鼠伤寒沙门氏菌的检测。

本发明还提供了检测鼠伤寒沙门氏菌的电化学生物传感器的制备方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

本发明中一共用到了6条DNA链，其序列分别是：

Aptamer:5′- AGT AAT GCC CGGTAGTTATT CAAAGATGAGTAG GA AAAGA -3’(SEQ IDNO.1)；

Probe3(P3): 5’- CTACTCATCTTTG TTTT-3’(SEQ ID NO.2)；

Probe1(P1)：5’-CACTGTCCACGGCCCTGC TTTT-3’(SEQ ID NO.3)；

Probe2(P2)：5’- CTACTCATCTTT GTTTT GCAGGGCCGTGGACAGTG AAAGATGAGTAG -3’(SEQ ID NO.4)；

Immobilized MB DNA(iDNA): 5’-MB-GCAG TTCAATT ACGGCC CTGC T–SH-3’ (SEQID NO.5)；

Helper: 5’- GCAGGGCCGTGGACAGTG -3’(SEQ ID NO.6)。

其中P1的下划线部分是P2下划线部分的互补序列，P3的斜体标注是P2斜体标注的互补序列。iDNA的3’端修饰-SH，通过Au-S共价键将iDNA固定在金电极表面，5’端修饰电活性物(MB)，可以在一定的电位下发生氧化还原反应。通过测量MB信号的变化来定量检测鼠伤寒沙门氏菌。

本发明中只用到了一种酶：Exonuclease Ⅲ。Exonuclease Ⅲ能够水解双链DNA的3’端，对双链DNA突出的3’端和单链没有水解作用，因此，Exonuclease Ⅲ对放大检测DNA提供了更加通用的平台。