[发明专利]一种用于培养人脐带间充质干细胞的培养基

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，涉及一种用于培养人脐带间充质干细胞的培养基。

背景技术

人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)是一类在早期发育过程中除造血干细胞以外具备全能细胞特点的另一类多能干细胞，具有自我更新、多向分化潜能，可以通过调节机体免疫，在脊髓损伤、糖尿病足以及免疫性疾病中得到广泛应用。人脐带间充质干细胞由于来源广泛，取材方便，对供着无不利影响，且不涉及伦理道德限制问题，具备广泛的临床应用前景。

目前已有的多种干细胞培养基，多为通用型干细胞培养基，并不仅用于单一特定的干细胞培养，多用于各种类干细胞培养。然而由于各类干细胞来源广泛，不同干细胞品种培养所需营养条件不尽相同，如果通用培养基无法满足单一类型干细胞的生长需求，可能引起该种类干细胞存活率降低，生长受抑，增殖缓慢，细胞形态和生物学性状等的改变，进而无法满足干细胞的临床应用需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于培养脐带间充质干细胞的培养基。解决现有培养基培养脐带间充质干细胞存在的分离获得的原代脐带间充质干细胞存活率降低，增殖缓慢，细胞形态和生物学性状等易发生改变，无法满足干细胞的临床应用需求的问题。

本发明所提供的用于培养脐带间充质干细胞的培养基，由无血清基本培养基和添加成分组成；所述添加成分为人胰岛素、人血清白蛋白、转铁蛋白和细胞因子组合；所述细胞因子组合为表皮细胞生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、IL-3和IL-6。

根据需要，本发明所提供的用于培养脐带间充质干细胞的培养基可以由以液体形式存在的所述无血清基本培养基和以固体形式存在的所述添加成分构成，也可以是向以液体形式存在的所述无血清基本培养基中添加了所述添加成分后形成的液体培养基。

在所述添加成分中，所述人胰岛素、所述人血清白蛋白、所述转铁蛋白和所述细胞因子组合的质量配比可为(2-10)μg：(0.1-1)mg：(2-10)μg：(6-110)ng。

在本发明的一个实施例中，所述添加成分中，所述人胰岛素、所述人血清白蛋白、所述转铁蛋白和所述细胞因子组合的质量配比具体为5μg：0.5mg：5μg：56ng。

在所述细胞因子组合中，所述表皮细胞生长因子、所述血小板衍生生长因子、所述IL-3和所述IL-6的质量配比可为(1-5)：(1-5)：(2-50)：(2-50)。

在本发明的一个实施例中，所述细胞因子组合中，所述表皮细胞生长因子、所述血小板衍生生长因子、所述IL-3和所述IL-6的质量配比具体为3：3：20：30。

当本发明所提供的用于培养脐带间充质干细胞的培养基为向以液体形式存在的所述无血清基本培养基中添加了所述添加成分后形成的液体培养基时，所述培养基中，所述人胰岛素的浓度可为2-10μg/mL；所述人血清白蛋白的浓度可为0.1-1mg/mL；所述转铁蛋白的浓度可为2-10μg/mL；所述表皮细胞生长因子的浓度可为1-5ng/mL；所述血小板衍生生长因子的浓度可为1-5ng/mL；所述IL-3的浓度可为2-50ng/mL；所述IL-6的浓度可为2-50ng/mL。

在本发明的一个实施例中，所述培养基中，所述人胰岛素的浓度具体为5μg/mL；所述人血清白蛋白的浓度具体为0.5mg/mL；所述转铁蛋白的浓度具体为5μg/mL；所述表皮细胞生长因子的浓度具体为3ng/mL；所述血小板衍生生长因子的浓度具体为3ng/mL；所述IL-3的浓度具体为20ng/mL；所述IL-6的浓度具体为30ng/mL。

所述无血清基本培养基可选自如下中任一：α-MEM培养基、DMEM培养基、DMEM/F12培养基、M199培养基、IMDM培养基、IMDM/F12培养基。其中，以所述α-MEM培养基为最优选。

在本发明的一个实施例中，所述用于培养脐带间充质干细胞的培养基具体为向所述α-MEM培养基中加入终浓度为5μg/mL的人胰岛素、终浓度为0.5mg/mL的人血清白蛋白、终浓度为5μg/mL的转铁蛋白、终浓度为3ng/mL的表皮细胞生长因子(EGF)、终浓度为3ng/mL的血小板衍生生长因子(PDGF)、终浓度为20ng/mL的IL-3和终浓度为30ng/mL的IL-6后得到的培养基。

本发明还保护所述用于培养脐带间充质干细胞的培养基的制备方法。

本发明所提供的用于培养脐带间充质干细胞的培养基的制备方法，具体包括如下(A)或(B)的步骤：