[发明专利]人JAK2V617F基因突变检测试剂盒

权利要求书

1.人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括A盒和B盒，A盒包括磁珠BC、裂解液BL、洗涤液BW1和洗脱液CE；B盒包括预混液Ⅰ、预混液Ⅱ、阳性标准品、阴性标准品、超纯水、15mg/mL的蛋白酶K溶液、DNA Loading Buffer和DNA Marker。

2.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述预混液Ⅰ制备步骤包括：将20μM的JAK3引物(SEQ ID NO.2所示)和20μM的JAK4引物(SEQ ID NO.3所示)等体积混合，然后将混合引物与2×Taq PCR MIX Loading Dye-free按体积比2:55的比例混匀即得。

3.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述预混液Ⅱ制备步骤包括：按照终浓度为5μM J2f引物(SEQ ID NO.4所示)、5μM J2r引物(SEQ ID NO.5所示)、10μM J2nf引物(SEQ ID NO.6所示)和40μM J2mr引物(SEQ ID NO.1所示)的量配制巢式PCR引物，然后将巢式PCR引物与2×Taq PCR MIX Loading Dye-free按体积比2:55的比例配制，混匀即得。

4.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液为将蛋白酶K溶解于Tris-HCl、CaCl₂和甘油三者的混合溶液中获得；所述Tris-HCl浓度为10mM，pH值7.5，CaCl₂浓度为20mM，甘油质量分数为50％。

5.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述阴性标准品制备步骤包括：将pKS-JAK2质粒1μL加入到100μL E.coli DH5α感受态细胞溶液中，混合均匀，42℃水浴热激90s，冰浴冷却至0℃，加入800μL LB液体培养基，37℃轻微振荡复苏1h，取100μL培养物涂含100μg/mL Amp的LB固体平板，37℃培养12～14小时；挑单菌落振荡过夜培养，提取质粒DNA，用超纯水将质粒DNA稀释到10ng/μL，即为阴性标准品。

6.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品的制备步骤包括：将pKS-JAK2V617F质粒1μL加入到100μL E.coli DH5α感受态细胞溶液中，混合均匀，42℃水浴热激90s，冰浴冷却至0℃，加入800μL LB液体培养基，37℃轻微振荡复苏1h，取100μl培养物涂含100μg/mL Amp的LB固体平板，37℃培养12～14小时；挑单菌落振荡过夜培养，提取质粒，用超纯水将质粒DNA稀释到10ng/μL，并按1：9的体积比与阴性标准品混合均匀即得阳性标准品。

7.根据权利要求1所述的人JAK2V617F基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各样品的量为：