[发明专利]一种检测罗库溴铵或其注射液中烯丙基溴含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体地说是一种检测罗库溴铵或其注射液中烯丙基溴含量的方法。

背景技术

罗库溴铵，化学名：溴化1-[17β-乙酰氧基-2β-(4-吗啉基)-5α-雄甾烷-3α-羟基-16β-基]-1-(2-丙烯基)吡咯溴化物，分子式：C₃₂H₅₃BrN₂O₄，分子量：609.68，其结构式为：

罗库溴铵是一种新型中效非去极化神经肌肉阻滞剂，为全身麻醉辅助用药，用于常规诱导麻醉期间气管插管，以及维持术中骨骼肌松弛。它通过竞争性机制与乙酰胆碱受体结合，阻止离子通道地激活及细胞膜地去极化，达到肌肉松弛地效果。1994年在美国批准上市，现如今年销量稳定在五千万美元。目前，国内有两家进口和两家本土企业也已上市。

目前已报道的罗库溴铵合成工艺中大多数使用了大量的烯丙基溴，文献报道烯丙基溴急性毒性：LD5030mg/kg(豚鼠经口)；LC501000mg/m³，1/2小时(大鼠吸入)，其残留可能会对人体健康造成伤害，需要对产品中烯丙基溴含量进行控制。然而，据文献检索可知，当前只有一篇名为“HPLC法测定罗库溴铵中溴丙烯的含量”的文章及授权公告号CN102288705B专利中给出了罗库溴铵中烯丙基溴含量检测的方法，同时专利中也提到它的方法在流动相调pH值之前，拖尾严重，且与罗库溴铵主峰较接近，另外，方法中使用了离子对试剂四甲基氢氧化铵来配制流动相，一方面增加了检测成本，另一方面增加了检测难度：①需使用磷酸调节水相的pH值，从强碱性调节到5.0；②流动相中加入了四甲基氢氧化铵，会造成系统难以平衡，增加检测时间；③四甲基氢氧化铵的加入会带来烯丙基溴主峰保留时间的漂移。

由于上述方法存在这些缺点，研究一种专属性强、简单快速的检测罗库溴铵及其注射液中烯丙基溴含量的方法显得尤为重要。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明通过对流动相、对照品/供试品配制方式和洗脱方式等特征进行改进，提供了一种适合于罗库溴铵原料或其注射液中烯丙基溴含量的方法。该方法具有流动相配制简单，系统稳定，专属性和重复性高的优点。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种检测罗库溴铵或其注射液中烯丙基溴含量的方法，将烯丙基溴对照品溶液、罗库溴铵供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，以外标法检测计算供试品溶液中烯丙基溴含量；

其中流动相采用梯度洗脱的方式进行：0~20min，流动相A：B=70%：30%；25~30min，流动相A：B=50%：50%；35~50min，流动相A：B=70%：30%；所述流动相A为纯水相，流动相B为乙腈；

所述烯丙基溴对照品溶液为由烯丙基溴对照品经由乙腈水溶液溶解稀释得到的原料药对照品溶液或注射液对照品溶液；所述罗库溴铵供试品溶液为由罗库溴铵原料药经由乙腈水溶液溶解得到的原料药供试品溶液或由罗库溴铵注射液经由乙腈水溶液稀释得到的注射液供试品溶液。

在一种优选方案中，原料药对照品溶液的浓度为0.25~0.30μg/mL，所述注射液对照品溶液的浓度为0.12~0.15μg/mL。罗库溴铵注射液的浓度为10mg/mL，原料药供试品溶液的浓度为15~20mg/mL，所述注射液供试品溶液的浓度为4～6mg/mL，优选5mg/mL。

在配制烯丙基溴对照品溶液或供试品溶液时，采用的50%~100%的乙腈水溶液，优选50%~70%或80%~100%乙腈水溶液，更优选50%~60%或85%~100%乙腈水溶液。

本发明中的色谱条件为：固定相采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，优选150×4.6mm 3μm。柱温35~45℃；流速0.8~1.2mL/min；检测波长205~215nm。

在进行高效液相色谱检测时，用于检测原料药的进样体积为20~30μL，用于检测注射液的进样体积为40~50μL，以对照品溶液中烯丙基溴计算理论塔板数不低于5000，拖尾因子为0.9~1.1前提下采用外标法对测定结果进行分析。

本发明的流动相A为纯水相，水相为超纯水、纯化水或饮用水；流动相B为分析级或色谱级乙腈。烯丙基溴对照品为USP级别、CP级别或工作标准品。

以下提供了一种具体的检测罗库溴铵或其注射液中烯丙基溴含量的方法，其包括如下步骤：

（1）流动相配制：流动相A为纯水相；流动相B为乙腈；