[发明专利]一种测定胶原蛋白分子质量的方法

权利要求书

1.一种测定胶原蛋白分子质量的方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1、制备标准样品：选用若干分子量分布于40～200kDa的蛋白作为分子质量标准品，所述分子质量标准品的数量大于等于5个；

S2、制备检测样品：取待测冻干后的胶原蛋白溶于质量浓度为0.01～0.1％的迭氮钠溶液中，搅拌至充分溶解，4℃静置24～48h，制得胶原蛋白液；

所述胶原蛋白液中待测胶原蛋白的终浓度为0.2～10mg/mL；

取所述胶原蛋白液，加入等体积的0.02mol/LNaH₂PO₄-0.2mol/LNa₂SO₄缓冲溶液，其中含质量浓度为0.2％十二烷基硫酸钠，摇床震荡1～5h，过0.45μm水系膜，得到待测胶原蛋白检测样品；

S3、样品测定：采用TSK-gel G4000-SWxl凝胶过滤色谱柱测定分别步骤S1制得的分子质量标准品及步骤S2制得的待测胶原蛋白检测样品，得到分子量标准品以及胶原蛋白的保留时间；

所述TSK-gel G4000-SWxl凝胶过滤色谱柱的规格为7.8mm×30.0cm；

具体检测条件为：

进样量：20μL；进样浓度：0.1～1mg/mL；检测波长：220nm；

流动相：0.01mol/LNaH₂PO₄-0.1mol/LNa₂SO₄缓冲溶液，其中含质量浓度为0.2％十二烷基硫酸钠；

洗脱流速：0.2～1mL/min；

S4、根据步骤S3测得的分子量标准品保留时间，以标准品分子质量的对数与保留时间做线性回归，得到胶原蛋白分子量标准曲线；

将步骤S3得到的待测胶原蛋白的保留时间与标准曲线进行比对，即可得到胶原蛋白的分子质量。

2.根据权利要求1所述测定胶原蛋白分子质量的方法，其特征在于，所述标准样品为肌球蛋白、β-半乳糖苷酶、磷酸酶b、牛血清蛋白、卵清蛋白作为分子质量标准品。