[发明专利]一种转基因黑点青鳉的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程，尤其是涉及一种转基因黑点青鳉的制备方法。

背景技术

持久性有机污染物(persistent organic pollutants,POPs)是指通过各种环境介质(大气、水、生物体等)能够长距离迁移并长期存在于环境，具有长期残留性、生物蓄积性、半挥发性和高毒性，对人类健康和环境具有严重危害的天然或人工合成的有机污染物质。

二噁英类化合物(Dioxins)是一类典型的持久性有机污染物，长期存在于自然环境中并引起高度关注。该类化合物毒性极强，在自然环境中极难降解，能在全球范围内长距离迁移,被生物体摄入后不易分解，并沿着食物链逐级浓缩放大，对生物具有致癌、致畸、内分泌干扰等作用。二噁英类化合物是多氯二苯并对二噁英(polychlorinated dibenzodioxins,PCDDs)、多氯二苯并呋喃(polychlorinated dibenzofurans,PCDFs)和多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)等一类多环芳烃的总称。其中被人们广泛关注的包括四氯二苯并对二噁英(Tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)、苯并芘(Benzoapyrene,BaP)、萘、蒽、菲等。该类化合物能与细胞内多环芳香烃化合物受体(Aryl hydrocarbon Receptor,AhR)蛋白结合，发生作用，诱导下游基因表达，引发一系列生物学效应。而TCDD是这类污染物中与AhR结合能力最强的物质，即毒性最强的二噁英。

二噁英类化合物在生物体内作用的分子机制主要是通过激活芳香烃受体(AhR)信号通路而引起生物学效应。AhR是一个螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子家族的成员，并具有Per-Arnt-Sim(PAS)结构域，属于bHLH超家族的转录因子。它的分子量存在种属差异。AhR的配基主要包括卤代芳香烃类(Polycyclic aromatic hydrocarbons,HAHs)和多环芳香烃类(Halogenated aromatic hydrocarbons,PAHs)化合物，主要是人工产生的外源性物质。近年来的研究发现，越来越多的天然化合物也能与AhR结合，说明AhR具有高度的配基多样性的特点。AhR执行功能时，需要和另一个bHLH家族成员ARNT形成异源二聚体，识别并结合靶基因。(Michael S,Alessandro P,Scott R,et al.Ligand binding and activation of the Ah receptor[J].Chemico-Biological Interactions,2002,141:3-24.)(Poland,A.Knutson,J.C.2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related halogenated aromatic hydrocarbons:examination-n of the mechanism of toxicity[J].Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol,1982,22:517-542.)

多数细胞质中的AhR未与配体结合处于静息复合物的状态，该复合物包括1个AhR、热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)二聚体、乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白2(hepatitis B virus X protein-associated protein 2,XAP2)以及一个p23辅伴侣蛋白分子结合。HSP90的结合使AhR维持一种非活化、可与配体结合的状态，它起到了稳定AhR的构象及抑制AhR与ARNT二聚化的作用；XAP2可以改变AhR被入核蛋白importinβ识别的能力，抑制AhR的泛素化降解。

而AhR在细胞质中的定位与自身核输出信号(nuclear export signal,NES)有关，AhR序列中存在两个NES，分别位于bHLH和PAS域，非结合配体的AhR利用的是PAS域的NES，而结合配体的AhR利用的是bHLH域的NES。