[发明专利]一种检测sh

权利要求书

1.一种检测sh_2-i基因型甜玉米的引物，其特征在于该引物的序列如下：

SL3：5′-CACTGTATGGCGGCATTGTT-3′；

sh2R：5′-AAGTTCCAGCCTCCTTCCTG-3′；

shiR：5′-TCCAGCCTCCTTCCGCTCC-3′。

2.一种检测sh_2-i基因型甜玉米的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所示的引物。

3.权利要求1所述的检测sh_2-i基因型甜玉米的引物在鉴定sh_2-i基因型或sh_2-i基因种质渗入超甜玉米基因型中的应用。

4.权利要求2所述的检测sh_2-i基因型甜玉米的试剂盒在鉴定sh_2-i基因型或sh_2-i基因种质渗入超甜玉米基因型中的应用。

5.一种sh_2-i基因型甜玉米分子技术鉴定的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)引进携带sh_2-i基因籽粒甜玉米种质资源；

(2)资源种植、自交、筛选鉴定：将引进的携带sh_2-i基因籽粒甜玉米种质在田间种植，连续经历5季5轮以上选株自交，穗选、粒选、田间株选，获得性状一致的自交系；

(3)分别种植sh_2-i、sh₂甜玉米自交系，通过杂交、回交、自交培育sh₂sh_2-i种质材料；

(4)将sh_2-i、sh₂甜玉米自交系sh₂基因区域进行高通量测序，比较不同基因材料在sh₂区域基因组差异，根据基因编码特异差异设计PCR扩增特征引物；其序列如权利要求1所示；

(5)提取不同甜玉米种质叶片DNA，以其为模板，进行PCR扩增；

(6)将步骤(5)中PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带差异进行判断，或PCR产物经测序，通过对不同种质材料DNA序列的差异鉴定sh_2-i基因型或sh_2-i基因种质是否渗入sh₂超甜玉米中。

6.根据权利要求5所述的sh_2-i基因型甜玉米分子技术鉴定的方法，其特征在于：采用引物SL3/shiR的PCR扩增产物电泳中出现明亮目的条带，则为基因型sh_2-ish_2-i或杂合基因型sh_2-ish₂；该目的条带的长度是579bp，碱基序列如SEQ ID No：4所示；

采用引物SL3/sh2R的PCR扩增产物电泳中出现明亮目的条带，则为基因型sh₂sh₂或杂合基因型sh_2-ish₂；该目的条带的长度是619bp，碱基序列如SEQ ID No：5所示；

采用引物SL3/shiR或SL3/sh2R的PCR扩增产物电泳中均出现明亮目的条带，则为杂合基因型sh_2-ish₂。

7.根据权利要求5所述的sh_2-i基因型甜玉米分子技术鉴定的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的资源种植按大田常规育种进行，在广东1年春秋两季种植。

8.根据权利要求5所述的sh_2-i基因型甜玉米分子技术鉴定的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的杂交、回交、自交培育中间种质材料按常规育种方法进行。

9.根据权利要求5所述的sh_2-i基因型甜玉米分子技术鉴定的方法，其特征在于：

步骤(5)中所述的提取不同甜玉米种质叶片DNA，以其为模板，进行PCR扩增按常规分子生物学方法进行。