[发明专利]一种高效扩增NKT细胞的方法

权利要求书

1.一种NKT细胞培养方法，其特征在于，所述方法首先使用α-GalCer、GLP-1、CD3及CS1对NKT细胞进行活化，并且活化后再进行扩增培养，所述的方法包括以下几个步骤：

(1)抗体包被

用PBS稀释CD3单抗及CS1单抗，并用稀释好的CD3单抗及CS1单抗包被T75培养瓶，CD3单抗及CS1单抗包被浓度分别为0.2μg/mL和35μg/mL，然后置于4℃孵育过夜或者37℃培养箱中孵育2h；

(2)PBMC分离及自体血清制备

使用Ficoll分离人外周血中的PBMC，并使用X-VIVO培养基将PBMC的浓度调整至约1×10⁶个/mL；同时将分离得到的血浆于56℃进行灭活30min；然后离心后取上清，于4℃储存备用；

(3)NKT细胞活化培养

将步骤(2)中分离后的PBMC细胞转移至步骤(1)中抗体包被的并用PBS清洗过的培养瓶中；然后加入IL-2、α-GalCer及GLP-1，它们的终浓度分别为500IU/mL、100ng及15ng/mL；最后加入7-10％的自体血清；

(4)NKT细胞的扩增培养

观察细胞状态，当观察到细胞的克隆团较多且较大时，将其转入新的培养瓶中，并补加已经添加IL-2及IL-21的X-VIVO培养基，IL-2及IL-21的终浓度分别为300IU/mL和15ng/mL；随后进行隔天补液；使细胞浓度维持在1×10⁶个/mL；在培养第14天后，进行细胞收集，所收集的细胞即为NKT细胞，

其中，所述克隆团较大是指在10X的显微镜下观察细胞团的直径大约1cm。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中的CD3及CS1单抗分别为FDA批准的药物muromonab和elotuzumab。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中自体血清量为10％。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述步骤(4)中的新的培养瓶是指未曾包被过的培养瓶。

5.一种NKT细胞，其特征在于，所述的NKT细胞是用权利要求1～4中任一项所述的培养方法所制备的。