[发明专利]一种检测家蚕二分浓核病毒的LAMP引物及其试剂盒

权利要求书

1.一组检测BmBDV病毒的LAMP引物组，所述引物组包括3对引物，

引物BmBDV-F3：TCTGACGTTGGTGGAAGT，

引物BmBDV-B3：AACTTGCTTTCCACTCGA；

引物BmBDV-FIP：TGAGGCGTCCATAGGACCTTTTTTGGAAGTGGAAAACGCAGT，

引物BmBDV-BIP：GAGGATCTGGAGGTGGTGGTTTTTTTGGCTTGTAAATAGGTTGG；

引物BmBDV-LF：ACCGCCCCCAGACACATT，

引物BmBDV-LB：GGAGGTGCTTCAGCAGAGG。

2.一种家蚕BmBDV病毒LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含家蚕BmBDV病毒LAMP预反应液，所述预反应液包含权利要求1所述的检测家蚕BmBDV的LAMP引物组，所述预反应液具体包括：1.5～2.0mM BmBDV-FIP和BmBDV-BIP，0.2～0.4mM BmBDV-F3和BmBDV-B3，0.2～0.5mM BmBDV-LF和BmBDV-LB，20～40mM Tris-HCl，10～15mM 氯化钾，15～20mM 硫酸铵，8～10mM 硫酸镁，0.1～0.2% Triton X-100，1.2～1.4mM dNTP，6-8U Bst DNA 聚合酶大片段，0.6～0.8M 甜菜碱。

3.权利要求1所述引物组用于非诊断目的的家蚕二分浓核病毒BmBDV信息的获取。

4.权利要求2所述试剂盒用于非诊断目的的家蚕二分浓核病毒BmBDV信息的获取。

5.一种家蚕二分浓核病毒BmBDV的信息获取的方法，其特征在于，所述方法用于非诊断目的，所述方法采用权利要求2所述的试剂盒进行，按照如下步骤进行：

S1. 家蚕样品中BmBDV基因的提取：

S2. 家蚕BmBDV病毒LAMP扩增：

（1）根据待检样品数，配制所需的预反应液，在预反应液中加入2～5μL DNA模板，再加入适量的去离子水，使反应体系总体积为25μL；

（2）标记清楚后，将检测反应管置于61～65℃温度下，反应30 min或45 min或60min，85℃灭活并溶解低熔点固体石蜡使得染料溶于反应液；

（3） 肉眼观察反应体系的颜色变化，同时产物用琼脂糖凝胶电泳分析。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述反应温度为62℃，反应时间为30min。