[发明专利]一种检测家蚕二分浓核病毒的LAMP引物及其试剂盒有效
申请号: | 201710223710.4 | 申请日: | 2017-04-07 |
公开(公告)号: | CN106868222B | 公开(公告)日: | 2020-03-31 |
发明(设计)人: | 吕鹏;陈克平;潘晔;林锋;姚勤;杨艳华;朱菲菲;马上上;陈亮;聂志超 | 申请(专利权)人: | 江苏大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
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地址: | 212013 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 家蚕 二分 病毒 lamp 引物 及其 试剂盒 | ||
1.一组检测BmBDV病毒的LAMP引物组,所述引物组包括3对引物,
引物BmBDV-F3:TCTGACGTTGGTGGAAGT,
引物BmBDV-B3:AACTTGCTTTCCACTCGA;
引物BmBDV-FIP:TGAGGCGTCCATAGGACCTTTTTTGGAAGTGGAAAACGCAGT,
引物BmBDV-BIP:GAGGATCTGGAGGTGGTGGTTTTTTTGGCTTGTAAATAGGTTGG;
引物BmBDV-LF:ACCGCCCCCAGACACATT,
引物BmBDV-LB:GGAGGTGCTTCAGCAGAGG。
2.一种家蚕BmBDV病毒LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含家蚕BmBDV病毒LAMP预反应液,所述预反应液包含权利要求1所述的检测家蚕BmBDV的LAMP引物组,所述预反应液具体包括:1.5~2.0mM BmBDV-FIP和BmBDV-BIP,0.2~0.4mM BmBDV-F3和BmBDV-B3,0.2~0.5mM BmBDV-LF和BmBDV-LB,20~40mM Tris-HCl,10~15mM 氯化钾,15~20mM 硫酸铵,8~10mM 硫酸镁,0.1~0.2% Triton X-100,1.2~1.4mM dNTP,6-8U Bst DNA 聚合酶大片段,0.6~0.8M 甜菜碱。
3.权利要求1所述引物组用于非诊断目的的家蚕二分浓核病毒BmBDV信息的获取。
4.权利要求2所述试剂盒用于非诊断目的的家蚕二分浓核病毒BmBDV信息的获取。
5.一种家蚕二分浓核病毒BmBDV的信息获取的方法,其特征在于,所述方法用于非诊断目的,所述方法采用权利要求2所述的试剂盒进行,按照如下步骤进行:
S1. 家蚕样品中BmBDV基因的提取:
S2. 家蚕BmBDV病毒LAMP扩增:
(1)根据待检样品数,配制所需的预反应液,在预反应液中加入2~5μL DNA模板,再加入适量的去离子水,使反应体系总体积为25μL;
(2)标记清楚后,将检测反应管置于61~65℃温度下,反应30 min或45 min或60min,85℃灭活并溶解低熔点固体石蜡使得染料溶于反应液;
(3) 肉眼观察反应体系的颜色变化,同时产物用琼脂糖凝胶电泳分析。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述反应温度为62℃,反应时间为30min。
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