[发明专利]细菌AB5肠毒素蛋白的定性、定量检测方法

权利要求书

1.细菌AB₅肠毒素的定性、定量检测方法，其特征在于：其包括如下步骤：

1）先提取待测样品中的蛋白，得到样品蛋白；

2）将样品蛋白进行酶切；

3）然后采用膜电喷雾电离质谱法进行AB₅肠毒素特异性肽段的检测，在肽段水平上定性、定量判定AB₅肠毒素编码基因的存在；所述AB₅肠毒素分别为AB₅肠毒素Ctx、AB₅肠毒素LT、AB₅肠毒素Stx1和AB₅肠毒素Stx2，其中所述AB₅肠毒素Ctx的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为FLDEYQSK、HDDGYVSTSISLR；AB₅肠毒素LT的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为TPNSIAAISMEN、ILSYTESMAGK；AB₅肠毒素Stx1的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为MASDEFPSMCPADGR、YNDDDTFTVK；AB₅肠毒素Stx2的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为AVNEESQPECQITGDRPVIK、YNEDDTFTVK。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：还包括先对待测样品进行增菌培养的步骤。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1）中提取待测样品中的蛋白采用超滤提取方式。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述酶切采用微波法进行酶切。

5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于：所述酶切所用酶为胰蛋白酶。

6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于：所述酶切的方式为：将样品蛋白先在碳酸氢铵溶液中溶解并且加入DTT在高温下反应，然后在IAA存在下在暗处反应；最后加入胰蛋白酶，并且在微波条件下进行酶切而成。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3）中采用膜电喷雾电离质谱法进行检测，所用装置为膜电喷雾离子源质谱仪。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述样品蛋白特异性肽段经膜电喷雾离子源使样品蛋白特异性肽段形成喷雾，实现离子化，然后进入质谱仪入口进行检测。

9.根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于：所述装置包括至少一层透析膜。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于：所述装置包括两层透析膜。