[发明专利]一种酵母培养物中甘露聚糖含量的测定方法

权利要求书

1.一种酵母培养物中甘露聚糖含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将酵母培养物进行预处理使其中的酵母细胞壁破壁；

(2)将步骤(1)中所述预处理后的样品在酸性条件下进行水解反应；

(3)将步骤(2)中所述水解反应后溶液的酸碱度调成中性后，与相应的衍生化试剂在一定条件下进行衍生化反应；然后以甘露糖为标准品，将其标准品溶液在相同条件下进行衍生化反应；

(4)将步骤(3)中所述衍生化后的样品溶液和标准品溶液经反相高效液相色谱进行分析检测；

(5)根据步骤(4)中所得到的色谱数据计算出样品中甘露糖的质量，再换算成甘露聚糖的含量；

其中，步骤(1)中，所述酵母细胞壁破壁是采用酶解处理，所述酶解处理是是将酵母培养物和超纯水以1:4～1:10的比例混匀后，β-葡聚糖酶和蜗牛酶按比例3:1添加，添加量在5～13mg/mL，酶解pH 4.0～6.0，酶解温度40～60℃，酶解时间2～8h；

其中，步骤(3)中，所述衍生化试剂为1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；

其中，步骤(4)中，所述反相高效液相色谱的色谱条件是以0.1mol/L pH5.5乙酸铵缓冲液与乙腈按照体积比80/20～60/40组成流动相洗脱，流速为0.5～1.5mL/min，反相色谱柱选用C18柱分离，紫外检测器在紫外波长250nm下检测。

2.根据权利要求1所述的酵母培养物中甘露聚糖含量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，在硫酸或盐酸条件进行水解反应；水解完成后用碱溶液调节溶液为中性。

3.根据权利要求2所述的酵母培养物中甘露聚糖含量的测定方法，其特征在于，所述硫酸水解是按照样品和72％硫酸的使用比例为每20mg酵母培养物用70～100uL的72％硫酸，在耐压玻璃密封管样品和硫酸混合后静置1～3h，之后加入5～8倍体积的超纯水，密封耐压玻璃密封管后在100℃下水解3～8h，水解完成用冰水冷却，用6M氢氧化钠溶液调为中性；所述盐酸水解是按照每20mg酵母培养物用的2～5mL的2mol/L盐酸，将样品和盐酸混合均匀后在密封管中100℃下水解1～10h，水解完成后用冰水冷却之后用2M氢氧化钠溶液调为中性。

4.根据权利要求1所述的酵母培养物中甘露聚糖含量的测定方法，其特征在于，衍生化处理的条件和方法是将等体积的甘露糖标准溶液或试样溶液、0.5mol/L现配现用的PMP甲醇溶液、0.3mol/L NaOH溶液，置于具塞离心管中，充分混匀后于60～90℃水浴衍生化反应30～90min，放冷后加入过量的0.3mol/L盐酸溶液，混匀，用三氯甲烷萃取出过量的PMP，最后将水层液离心后，取上清液待测。