[发明专利]一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法

权利要求书

1.一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，步骤如下：

(1)、制备蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1的复合物PA/G-Ab1；

(2)、制备碳点标记荧光探针CDs-Ab2：以柠檬酸为碳源，二乙烯三胺修饰合成碳点，将CDs在EDC、NHS的作用下，与多克隆抗体Ab2通过酰胺键共价结合，形成CDs-Ab2；

(3)、将步骤(1)所得PA/G-Ab1与血清内的GFAP特异性反应，将其从复杂基质中分离富集，形成PA/G-Ab1-GFAP；

(4)、将PA/G-Ab1-GFAP与CDs-Ab2相结合形成夹心结构PA/G-Ab1-GFAP-Ab2-CDs，用PBS溶液清洗至上清液无荧光后测试荧光强度，根据标准曲线，得到血清中GFAP的含量。

2.根据权利要求1所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，取蛋白A/G琼脂糖纯化树脂与Ab1结合后借助BSA封闭抗体上非特异性位点，且用结合缓冲液清洗，去除未反应的Ab1和杂质，冷藏备用。

3.根据权利要求2所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于结合缓冲液的组分为0.15M NaCl、20mM Na₂HPO₄，pH为7.0。

4.根据权利要求1所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中所述蛋白A/G琼脂糖纯化树脂与Ab1体积比为1:5，Ab1为鼠抗人GFAP单克隆抗体，浓度为20μg/mL。

5.根据权利要求1所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于步骤(3)中PA/G-Ab1与测样血清体积比为1:10。

6.根据权利要求1所述的定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，其特征在于：步骤(2)中CDs与Ab2质量浓度比为15:1。