[发明专利]一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法

权利要求书

1.一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制样：取固态休闲食品放入粉碎机或均质机中粉碎充分，并取0.1kg粉末做试样；

S2、试样提取：精确称取步骤S1中制得的试样4.0g，置于50mL离心管中，加0.2mL浓度为1μg/mL的甲基丙烯酰胺内标溶液和20mL提取溶剂，漩涡均匀，超声提取10min，以10000r/min的转速，离心5min，将上清液转移至100mL离心管中，再加10mL提取溶剂二次提取，以10000r/min的转速，离心5min，合并上清液；

S3、试样净化：将10mL正己烷加入到步骤S3中所得的合并上清液中，剧烈震荡后弃去上层正己烷层，往下层中加入硫酸铵至饱和状态，然后加入20mL乙酸乙酯，剧烈震荡，以3000r/min的转速离心，转移乙酸乙酯层至鸡心瓶，再加乙酸乙酯20mL重复萃取，合并乙酸乙酯层，在40℃水浴环境下，真空浓缩干燥，加入2mL水溶洗鸡心瓶，溶洗液经0.22μm膜过滤后转移至固相萃取柱中，在流速不超过2mL/min的条件下重复过柱两次，最后用2mL洗脱液，在流速≤2mL/min的条件下淋洗固相萃取柱，收集流出液，定容至2.0mL，得测试液；

S4、工作曲线绘制：分别配制浓度为0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5μg的丙烯酰胺标准工作液和甲基丙烯酰胺标准工作液，并分别采用液相色谱-串联质谱法进行分析，以峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，并对样品中丙烯酰胺的含量进行计算。

2.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S2中的提取溶剂为甲醇10%wt和浓度为0.1%的甲酸水90%wt的混合溶剂。

3.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S3中的洗脱液为甲醇20%wt和浓度为0.1%的甲酸水80%wt的混合溶剂。

4.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S4中的丙烯酰胺标准工作液的配制方法为：精确称取纯度≥99%的丙烯酰胺0.1g至100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容。

5.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S4中的甲基丙烯酰胺标准工作液的配制方法为：精确称取纯度≥98%的甲基丙烯酰胺0.1g至100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容。

6.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S4中液相色谱-串联质谱法的工艺条件包括：1、色谱柱为规格为150mm×2.1mm，3.5µm的C18柱或柱效相当的色谱柱；2、流动相为乙腈5%+0.1％甲酸水溶液95%；3、柱温为35℃；4、流速为0.2mL/min；5、进样量为10μL；6、离子源为电喷雾离子源ESI；7、扫描方式为正离子扫描；8、检测方式为多反应监测MRM；9、干燥气温度为350℃、干燥气流速为11L/min；10、雾化器压力为40psi；11、毛细管电压为4000V。

7.根据权利要求1所述的一种休闲食品中丙烯酰胺的测定方法，其特征在于，所述步骤S4中丙烯酰胺含量的计算公式为，式中，X为食品中丙烯酰胺的含量，μg/kg；C为测定液中丙烯酰胺的浓度，ng/mL；V为测定液体积，mL；M为试样质量，g。