[发明专利]利用喜树悬浮细胞生产N1

说明书

本发明涉及一种利用喜树悬浮细胞生产N¹‑乙酰犬尿胺的方法，属于医药生物技术领域。本方法包括以下步骤：(1)将喜树悬浮细胞接种到MS液体培养基进行培养，培养过程中添加色胺；(2)收集相应的悬浮细胞和细胞培养液，(3)分离提取N¹‑乙酰犬尿胺。通过在喜树悬浮细胞中添加色胺，成功分离得到N¹‑乙酰犬尿胺。该化合物及前体物质犬尿胺在有机合成中有很好的运用，并且其部分衍生物都具有很好的药理活性。

技术领域

本发明涉及一种利用喜树悬浮细胞生产N¹-乙酰犬尿胺的方法，属于医药生物技术领域。

背景技术

随着植物细胞法的建立和运用，目前有很多研究通过该方法获得目的产物以及高附加值的植物次生代谢产物。植物细胞培养法是在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。该方法具有以下优势：1)不受地理、季节和气候条件的限制；2)节省土地，降低成本，生产周期短，可大大提高经济效益；3)可代替整体植株在工厂内连续生产所需产物；4)可通过添加抑制剂等使生物合成按照人的意志进行；5)可通过诱变筛选，获得高产细胞株，并且可以进行特定的生物转化获得新的有用物质。

目前，已有文献报道推测了一些多环芳烃生物碱化合物的生物合成途径，其中色氨酸代谢产生犬尿胺及其类似物就是这类化合物生物合成的关键步骤。其中犬尿胺经乙酰化得到N¹- 乙酰犬尿胺就有可能参与到一些多环芳烃生物碱化合物的生物合成。因为多环芳烃生物碱类化合物普遍具有非常好的药理活性，所以很多研究者通过模拟生物合成的方法来指导这类化合物的有机合成，目前也有一些化合物成功全合成出来。从合成路线来看，犬尿胺的合成都是必不可少并且是非常关键的。但是，犬尿胺的合成相对比较繁琐，产率也只有60％左右。

发明内容

针对现有制备N¹-乙酰犬尿胺的工艺方法复杂、制备途径单一的问题，本发明提供了一种通过喜树悬浮细胞将色胺转化为N¹-乙酰犬尿胺的生产方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

(1)将喜树悬浮细胞接种到MS30液体培养基进行培养，培养过程中添加色胺；(2)收集相应的悬浮细胞和细胞培养液，(3)分离提取N¹-乙酰犬尿胺。

上述步骤(1)中的MS30液体培养基含有0.2～1mg/L萘乙酸、0.2～1mg/L 6-苄基氨基嘌呤、0.05～0.3mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸和20-50mM NH₄⁺/NO₃^-，所述NH₄⁺与NO₃^-的摩尔比为5:1；培养条件：光照，摇床100～150rpm，温度25±3℃，pH5-6.5。

进一步地，上述步骤(1)中的MS30液体培养基含有0.5mg/L萘乙酸、0.5mg/L 6-苄基氨基嘌呤、0.1mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸和40mM NH₄⁺/NO₃^-，所述NH₄⁺与NO₃^-的摩尔比为5:1；培养条件优选：光照25μmol m^-2s^-l，摇床125rpm，温度25±0.5℃，pH5-6.5。

进一步地，上述步骤(1)中，在喜树悬浮细胞培养3天后加色胺，继续培养9～15天。