[发明专利]一种诱导小鼠骨髓细胞稳定分化为未成熟树突状细胞的专用培养基及培养方法

权利要求书

1.一种诱导小鼠骨髓细胞稳定分化为未成熟树突状细胞的培养基，其特征在于，该培养基由X-VIVO 20 90～95v/v％，LPS 1μg/ml，GM-CSF 40ng/ml、IL-4 10ng/ml、青霉素-链霉素10⁶U/ml组成，余量为无菌注射用水；其中GM-CSF与IL-4的质量比为4：1。

2.根据权利要求1所述的诱导小鼠骨髓细胞稳定分化为未成熟树突状细胞的培养基，其特征在于，该培养基由X-VIVO 20 95v/v％，LPS 1μg/ml，GM-CSF 40ng/ml、IL-4 10ng/ml、青霉素-链霉素10⁶U/ml组成，余量为无菌注射用水。

3.利用权利要求1或2所述培养基进行imDCs体外诱导分化的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.冰浴上收集小鼠骨髓细胞并制成悬液，离心后弃上清；

S2.向S1离心得到的细胞沉淀加入3～5ml红细胞裂解液，混匀后静置2min，离心后弃上清；

S3.将步骤S2离心得到的细胞重悬于RPMI1640中，离心后弃上清；

S4.重复步骤S3两次；

S5.将步骤S4离心得到的细胞重悬于权利要求1或2所述的培养基中，然后置于培养箱中孵育；之后隔天换液一次；

S6.培养第1、第3天，每次换液为全量换液，培养至第5天后重新铺板；培养至7天后获得imDCs。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，S1所述骨髓细胞取自小鼠胫骨、股骨。

5.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，S1，S2，S3所述离心的条件均为4℃，1000rpm，2～5min。

6.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，S5细胞重悬后细胞密度为0.5×10⁶/ml～1×10⁶/ml。