[发明专利]一种重组大肠杆菌及其构建方法与通过代谢工程生产葡萄糖醛酸的方法在审
| 申请号： | 201710200330.9 | 申请日： | 2017-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN107022514A | 公开（公告）日： | 2017-08-08 |
| 发明（设计）人： | 娄文勇;苏慧慧;宗敏华;徐培;华洋林;杨继国 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P19/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 大肠杆菌 及其 构建 方法 通过 代谢 工程 生产 葡萄 糖醛酸 | ||
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌同时表达肌醇-1-磷酸合成酶基因Ino1和肌醇氧化酶基因MIOX。
2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述肌醇-1-磷酸合成酶基因Ino1来源于酿酒酵母、毕赤酵母、番茄、玉米和大豆中的任意一种；所述肌醇氧化酶基因MIOX来源于酿酒酵母、毕赤酵母、番茄、玉米和大豆中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述肌醇-1-磷酸合成酶基因Ino1、肌醇氧化酶基因MIOX的核苷酸序列分别是SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2所示的序列。
4.根据权利要求1或3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的出发宿主菌为大肠杆菌。
5.根据权利要求1或3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述肌醇-1-磷酸合成酶基因Ino1和肌醇氧化酶基因MIOX为整合表达。
6.一种权利要求1或3所述的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将肌醇-1-磷酸合成酶基因Ino1和肌醇氧化酶基因MIOX连接到双元表达载体上转化到大肠杆宿主菌株，得到重组大肠杆菌。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：以番茄Solanaceae Lycopersicon 1706基因组为模板扩增MIOX基因、Ino1基因，并分别加上合适酶切位点，将片段连接到双元表达载体pETDuet1后，用化学法转化DH5α中，筛选获得正确的重组质粒，命名为pETDuet1-Ino1-MIOX，将重组质粒转化到宿主菌E.coli BL21(DE3)中既得到重组大肠杆菌，命名为E.coli BL21(DE3)/Ino1-MIOX。
8.一种利用权利要求1所述的重组大肠杆菌生产葡萄糖醛酸的方法，其特征在于，该方法是以葡萄糖、甘油、蔗糖或者肌醇为底物催化合成葡萄糖醛酸。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法具体是将重组大肠杆菌种子液以2% - 5%的接种量接种到发酵培养基中，于25℃ - 30℃，160 rpm - 200 rpm，培养80 h。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的碳源为葡萄糖和粗甘油中的一种或两种。
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